[發(fā)明專利]前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110324656.5
• 申請(qǐng)日: 2011-10-21
• 公開（公告）號(hào): CN102532275A
• 公開（公告）日: 2012-07-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧子新;鄔益鳴;黃曦;殷俊
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海交通大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K7/56
• 分類號(hào): C07K7/56;C12N15/11;C12N15/76;A01N43/90;A01P21/00
• 代理公司: 上海漢聲知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31236
• 代理人: 郭國(guó)中

1.一種前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，是通過包括以下步驟的方法獲得的：在環(huán)噻唑霉素前體肽基因cltA內(nèi)插入兩個(gè)BglII和SpeI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)；用突變引物與雙酶切產(chǎn)物相連接構(gòu)建來實(shí)現(xiàn)原位點(diǎn)突變環(huán)噻唑霉素前體肽基因cltA；然后通過在鏈霉菌的模式中的異源表達(dá)獲得環(huán)噻唑霉素類似物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述在環(huán)噻唑霉素前體肽基因cltA內(nèi)插入兩個(gè)BglII和SpeI限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)的方法，具體包括如下步驟：

(1)選用pMD-18T載體，與PCR擴(kuò)增出來含有環(huán)噻唑霉素前體肽基因cltA的部分環(huán)噻唑霉素基因簇的3kb片段相連接，PCR擴(kuò)增產(chǎn)生的片段兩端含有限制性內(nèi)切酶SnaBI和SacI酶切位點(diǎn)，切下再與pJTU4892相連接；

(2)通過PCR-Targeting的方法將質(zhì)粒pJTU4892中的aac(3)IV阿泊拉霉素抗性基因替換成neo卡那霉素抗性基因，得到質(zhì)粒pJTU4895；

(3)用限制性內(nèi)切酶SnaBI和SacI從含有BglII和SpeI識(shí)別位點(diǎn)的重組質(zhì)粒pMD-18T-3kb切下3kb的片段，與用限制性內(nèi)切酶SnaBI和SacI酶切處理過的載體pJTU4895相連接，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH10B，獲得還有限制性內(nèi)切酶BglII和SpeI識(shí)別位點(diǎn)的質(zhì)粒pJTU4896；

(4)用XbaI和EcoRI酶切處理pJTU4896的片段與用XbaI和EcoRI酶切處理pSET152的片段連接構(gòu)建得到質(zhì)粒pJTU4897，該質(zhì)粒pJTU4897含有aac(3)IV阿泊拉霉素抗性基因，并且含有限制性內(nèi)切酶BglII和SpeI識(shí)別位點(diǎn)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素抗生素類似物，其特征在于，所述原位點(diǎn)突變環(huán)噻唑霉素前體肽基因cltA具體為突變了環(huán)噻唑霉素前體肽基因的7個(gè)位點(diǎn)中任一位點(diǎn)或兩位點(diǎn)的氨基酸殘基，所述7個(gè)位點(diǎn)為C3、T4、S5、T6、G7、T8和P9位。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述異源表達(dá)是在鏈霉菌的模式菌株變鉛青鏈霉菌Streptomyces?lividans?1326中的異源表達(dá)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述環(huán)噻唑霉素類似物對(duì)應(yīng)的突變株為C3S、T4D、T6D、T6V、T6G、T6S、T6C、G7A、G7S、T8D、T8S、P9H、P9A或T68D。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述環(huán)噻唑霉素類似物對(duì)應(yīng)的突變株為T6D，T6S，T6V，T6G，T8S或P9A。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述環(huán)噻唑霉素類似物對(duì)應(yīng)的突變株為T6S，T6V，T6G或T8S。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的前體肽基團(tuán)突變產(chǎn)生的環(huán)噻唑霉素類似物，其特征在于，所述環(huán)噻唑霉素類似物的結(jié)構(gòu)式為式(I)、式(II)、式(III)、式(IV)或式(V)所示，

9.權(quán)利要求6所述的環(huán)噻唑霉素類似物在制備抑制玉米小斑生長(zhǎng)的抑制劑中的用途。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備抑制玉米小斑生長(zhǎng)的抑制劑中的用途，其特征在于：所述抑制劑采用的環(huán)噻唑霉素類似物對(duì)應(yīng)的突變株為T6S，T6V，T6G或T8S。