[發明專利]一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1,5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201110324523.8
• 申請日: 2011-10-22
• 公開（公告）號: CN102382875A
• 公開（公告）日: 2012-03-21
• 發明（設計）人: 商純爾;陳青松
• 申請（專利權）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/54
• 分類號: C12Q1/54;C12Q1/48;C12Q1/32
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

1.一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1，5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除方法，其特征在于：配制pH6.0-9.0的2-瑪啡琳乙基磺酸(MES)緩沖液，其中含有一定量的葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)和ATP，加入含葡萄糖(Glu)的血清樣本，在ATP存在下，GK將Glu轉化為葡萄糖-6-磷酸(G6P)，同時生成二磷酸腺苷(ADP)；在NADP+存在下，G6PD進一步把G6P轉化為6-磷酸葡萄糖內酯(G6PL)；反應中生成的ADP在PEP的存在下經PK作用重新轉化為ATP。

2.根據權利要求1所述的一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1，5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除方法，其特征在于：用于實現上述方法的葡萄糖清除試劑的主要物質為2-瑪啡琳乙基磺酸(MES)緩沖液、葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)和三磷酸腺苷(ATP)組合。

3.根據權利要求1所述的一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1，5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除方法，其特征在于：測試溫度控制在20-50℃，時間控制在3-5分鐘，血清樣本和葡萄糖清除試劑的體積比控制在1/10-1/200。

4.根據權利要求2所述的一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1，5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除方法，其中葡萄糖清除試劑的主要物質的最適濃度為：pH6.0-9.0MES緩沖液為20-2000mmol/L、GK為1-50KU/L、G6PD為5-200KU/L、NADP為5-60mmol/L、PK為0.5-20KU/L、PEP為1-3mmol/L、ATP為0.2-2mmol/L、血清樣本中的Glu為0-60mmol/L。

5.一種適用于吡喃糖氧化酶法測定血清1，5-脫水葡糖醇的高濃度葡萄糖清除的試劑盒，該試劑盒含有pH6.0-9.0的2-瑪啡琳乙基磺酸(MES)緩沖液，該緩沖液包含一定量的葡萄糖激酶(GK)、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、丙酮酸激酶(PK)、磷酸烯醇式丙酮酸鹽(PEP)和ATP。

6.權利要求5所述的試劑盒，其中各組分的最適濃度為：pH6.0-9.0MES緩沖液為20-2000mmol/L、GK為1-50KU/L、G6PD為5-200KU/L、NADP為5-60mmol/L、PK為0.5-20KU/L、PEP為1-3mmol/L、ATP為0.2-2mmol/L、血清樣本中的Glu為0-60mmol/L。