[發明專利]一種海洋油污微生物菌群的篩選和馴化方法及應用

無效

• 申請號: 201110324515.3
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102433260A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 鄭剛;楊志堅;張文武;肖金星
• 申請（專利權）人: 浙江大學舟山海洋研究中心
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C02F3/34;C02F103/08
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種海洋油污微生物菌群的篩選和馴化方法，通過以下步驟實現：

（Ⅰ）裝置設計：裝置由缸體（11）、隔板（3）、右溫度計（4）、左溫度計（5）、造浪器（6）、控溫裝置（7）和照明裝置（8）組成，缸體（11）底部兩邊設有右出水管口（1）和左出水管口（9），并相應設有右水閥（2）和左水閥（10），在缸體中間設有一可卸載的隔板（3），將缸體（11）分隔成左右2個空間，在缸體兩側分別安裝左溫度計（5）和右溫度計（4），缸體（11）右側安裝有可卸載的人工造浪器（6）和控溫裝置（7），造浪器（6）和控溫裝置（7）通過吸盤吸住缸體內壁，照明裝置（8）安裝在缸體上部，人工造浪器（6）、控溫裝置（7）和照明裝置（8）分別通過插頭連接外接電源；

（Ⅱ）菌源樣品采集：從靜水層中收集水樣，從油污泥表層中采集0.5-1.0kg污泥樣，分別置于無菌器皿中，在24小時內進行步驟（3）富集培養或4℃下密封保存；?

（Ⅲ）菌群富集：

取水樣10ml和污泥樣品0.5g放于500ml一代富集培養基中，在25℃，140rpm下進行搖床富集培養一天時間，即獲得一代富集菌群培養液；

經過第一步的富集培養后，按照一代富集菌群培養液:二代富集培養基=1:10的比例，將一代富集菌群培養液添加到二代富集培養基中，在25℃，140rpm下繼續富集培養一天，至油水混合現象出現，即獲得二代富集菌群培養液；

然后取二代富集菌群培養液，按照二代富集菌群培養液:三代富集培養基=1:10的比例添加到三代富集培養基中，在25℃，140rpm下繼續富集培養，至油水混合現象出現，至此富集完畢，得到三代富集菌群培養液；

其中一代富集培養基組成：

酵母提取物??????????????????????1?g/L?

蛋白胨??????????????????????????5?g/L

尿素????????????????????????????1.6?g/L

K₂HPO_4????????????????????????????8?g/L

油污????????????????????????????5?g/L??????????????

海水????????????????????????????1?L

pH??????????????????????????????7.0±0.5??

溫度25℃；

二代富集培養基組成：

酵母提取物??????????????????????1?g/L?

蛋白胨??????????????????????????5?g/L

尿素????????????????????????????1.6?g/L

K₂HPO_4???????????????????????????8?g/L

油污????????????????????????????10?g/L???????????????

海水????????????????????????????1?L

pH??????????????????????????????7.0±0.5?

溫度25℃；

三代富集培養基組成：

酵母提取物??????????????????????1?g/L?

蛋白胨??????????????????????????5?g/L

尿素????????????????????????????1.6?g/L

K₂HPO₄???????????????????????????8?g/L

油污????????????????????????????20?g/L???????????????

海水????????????????????????????1?L

pH??????????????????????????????7.0±0.5?

溫度25℃；

（Ⅳ）菌群馴化：

將步驟（3）得到的三代富集培養菌群培養液按照體積比為1:100的比例加到盛有含油量質量體積比1%的油污廢水的模擬裝置右側的油污廢水中，同時按照濃度比生化需氧量:尿素:磷酸二氫鉀=100:5:1將尿素和磷酸二氫鉀混合，溫度25℃，進行馴化處理，連續換水三次后，缸體（11）底部即為馴化好的微生物菌群。