[發(fā)明專利]一種海洋油污微生物菌群的篩選和馴化方法及應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110324515.3
• 申請(qǐng)日: 2011-10-21
• 公開（公告）號(hào): CN102433260A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄭剛;楊志堅(jiān);張文武;肖金星
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)舟山海洋研究中心
• 主分類號(hào): C12N1/00
• 分類號(hào): C12N1/00;C02F3/34;C02F103/08
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司 33200
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬海水處理領(lǐng)域，涉及一種海洋油污微生物菌群的篩選和馴化方法，適合海洋油污廢水和污泥生物修復(fù)和生物處理。

背景技術(shù)

石油是非常寶貴的燃料、潤(rùn)滑劑和化工原料。隨著經(jīng)濟(jì)和社會(huì)的迅速發(fā)展，油類及其產(chǎn)品廣泛地用于國(guó)民經(jīng)濟(jì)的各個(gè)領(lǐng)域和人類的日常生活中，而且其使用量與日俱增。隨著世界對(duì)石油及其制品日益增長(zhǎng)的需求，在海上開采、運(yùn)輸、裝卸以及利用石油過程中溢油事故日益增多，使大量石油進(jìn)入水體、流入海洋。油類污染物質(zhì)已經(jīng)成為海洋的主要污染物之一。石油進(jìn)入海洋水體后，對(duì)水生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重破壞，使大量水生生物死亡，并對(duì)水資源、生物資源和養(yǎng)殖、旅游業(yè)帶來巨大損失[C.J?.Camphuysen,M?Heubeek．Marine?oil?pollution?and?beached?bird?surveys：thedevelopment?of?a?sensitive?monitoring?h3stnnment們．Environmental?pollution．2001，：443-461]。目前，海洋石油污染治理己被列入“2l世紀(jì)重大議程”，成為當(dāng)今環(huán)境工作者研究的熱點(diǎn)問題。

目前海洋油污處理方法主要有：物理方法，化學(xué)方法和生物方法。物理方法適用于較厚油層的回收處理，但其對(duì)于厚度小于0.3cm的薄油層和乳化油效果較差，且受風(fēng)浪和石油性質(zhì)等因素的限制。化學(xué)方法成本高，且容易造成二次污染。與傳統(tǒng)的物理、化學(xué)方法相比，生物修復(fù)方法能夠更有效地清除海洋石油污染，對(duì)人和環(huán)境造成的影響小，它能夠使污染物最終分解為二氧化碳和水，而且生物修復(fù)過程迅速，費(fèi)用低，修復(fù)費(fèi)用僅為傳統(tǒng)物理、化學(xué)修復(fù)的30％-50％[Hicksbn.?Caplanja,?Bioremediati：Anatural?solution[J]．Pollution?Engineering，1993，25(2)：30-33]。

通過近些年的研究雖然已發(fā)現(xiàn)了大量的可降解石油微生物，但最大問題缺少穩(wěn)定和適應(yīng)性強(qiáng)的菌株，并且某一種類的微生物只能對(duì)特定的石油組分有降解作用。在目前的海洋石油降解菌群篩選中，主要存在著馴化時(shí)間長(zhǎng)，鹽度適應(yīng)不夠和篩選過程繁瑣等問題。因此，針對(duì)海水的高鹽度，研究高效石油降解混合菌群對(duì)海洋油污的生物修復(fù)和生物處理具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種海洋油污微生物菌群的篩選和馴化方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)：

1.?裝置設(shè)計(jì)：設(shè)計(jì)一種用于模擬海灘溢油生物修復(fù)的裝置，由缸體、隔板、右溫度計(jì)、左溫度計(jì)、造浪器、控溫裝置和照明裝置組成，缸體底部?jī)蛇呍O(shè)有右出水管口和左出水管口，并相應(yīng)設(shè)有右水閥和左水閥，在缸體中間設(shè)有一可卸載的隔板，將缸體分隔成左右2個(gè)空間，在缸體左右兩側(cè)分別安裝左溫度計(jì)和右溫度計(jì)，從外部可觀察到溫度計(jì)的讀數(shù)，缸體右側(cè)安裝有可卸載的人工造浪器，造浪器通過吸盤吸住缸體內(nèi)壁，控溫裝置也通過吸盤吸住缸體內(nèi)壁以固定，可卸載照明裝置安裝在缸體上部，人工造浪器和控溫裝置、照明裝置分別通過插頭連接外接電源。缸體材料選用透明的普通玻璃或有機(jī)材料。

2.菌源樣品采集：從靜水層中收集水樣，從油污泥表層中采集0.5-1.0kg污泥樣，分別置于無菌器皿中，在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行步驟（3）富集培養(yǎng)或4℃下密封保存。

3.菌群富集：

取水樣10ml和污泥樣品0.5g放于500ml一代富集培養(yǎng)基中，在25℃，140rpm下進(jìn)行搖床富集培養(yǎng)一天時(shí)間，即獲得一代富集菌群培養(yǎng)液；

經(jīng)過第一步的富集培養(yǎng)后，按照一代富集菌群培養(yǎng)液:二代富集培養(yǎng)基=1:10的比例，將一代富集菌群培養(yǎng)液添加到二代富集培養(yǎng)基中，在25℃，140rpm下繼續(xù)富集培養(yǎng)一天，至油水混合現(xiàn)象出現(xiàn)，即獲得二代富集菌群培養(yǎng)液；

然后取二代富集菌群培養(yǎng)液，按照二代富集菌群培養(yǎng)液:三代富集培養(yǎng)基=1:10的比例添加到三代富集培養(yǎng)基中，在25℃，140rpm下繼續(xù)富集培養(yǎng)，至油水混合現(xiàn)象出現(xiàn)，至此富集完畢，得到三代富集菌群培養(yǎng)液。

其中一代富集培養(yǎng)基組成：

酵母提取物（Yeast?extract）???????1?g/L?

蛋白胨（Peptone）???????????????5?g/L

尿素???????????????????????????1.6?g/L

K₂HPO_4????????????????????????8?g/L

油污（原油：柴油=1:5）?????????5?g/L??????????????