[發明專利]促甲狀腺激素受體基因突變位點檢測試劑盒、使用方法和應用

有效

• 申請號: 201110322754.5
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102344966A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 丁鋼強;樓曉明;朱文明;朱旭平;朱勤瑋;邵俊斌
• 申請（專利權）人: 浙江省疾病預防控制中心;上海之江生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

技術領域

本發明涉及基因突變檢測領域，具體涉及一種促甲狀腺激素受體基因突變位點檢測試劑盒、使用方法和應用。

背景技術

甲狀腺的主要生理功能是通過促甲狀腺激素(TSH)作用于甲狀腺細胞膜上的促甲狀腺激素受體(TSHR)來控制的，TSHR屬于G蛋白偶聯受體家族的一員，其膜外區氨基酸末端很長，是決定與TSH及TSAB特異性結合的主要部分。TSHR的主要功能是與TSH結合，通過腺昔酸環化酶(AC)-CAMP途徑引起一系列生物學反應，促進甲狀腺激素的分泌，提高甲狀腺的攝碘能力并促進甲狀腺激素的合成、釋放，對甲狀腺組織的生長、分化等起著非常重要的作用。許多甲狀腺疾病與TSHR基因突變有關。由于TSHR基因突變，患者體內存在一種特殊免疫球蛋白TSHR抗體(TSHRAb)，根據抗體與TSHR結合后產生的效應不同，TSHRAb分為兩種類型：刺激型和抑制型。刺激型為：甲狀腺刺激抗體(TSAb)；抑制型為：促甲狀腺激素結合阻斷免疫球蛋白(TB?I)和甲狀腺刺激阻斷抗體(TSBAb)。前者結合到甲狀腺細胞膜上的TSHR上可引起甲狀腺增生和甲狀腺激素的產生和分泌增多，而后者則阻斷TSH與TSHR結合，導致甲狀腺萎縮和功能下降。

研究發現，TSHR基因的突變與甲狀腺腺瘤、Grave’s病、先天性甲狀腺機能亢進癥、先天性甲狀腺功能減退癥等多種甲狀腺疾病相關，在A?Hebrant等的研究(Genetichyperthyroidism：hyperthyroidism?due?to?activating?TSHR?mutations?European?Journalof?Endocrinology[J].2011.164：1-9)中指出TSHR上多個易突變基因的位點示意圖(見說明書附圖圖1)。在TSHR的突變位點中，有多個突變位點同時與兩種以上的甲狀腺疾病形成相關，如：TSHR?623位點和631位點的突變均與甲狀腺腺瘤和先天性甲亢相關，當623位點由Ala突變為Ile，則表明與甲狀腺腺瘤形成相關；當623位點由Ala突變為Val時，則導致甲亢和彌漫性甲狀腺腫。

因此TSHR基因突變位點的檢測，一方面可作為臨床對相關甲狀腺疾病的輔助診斷，另外一方面也可為相關甲狀腺疾病的預防提供依據。現有技術中對于突變位點的檢測，主要有兩個層次，一是蛋白質層次的間接檢測；二是對遺傳物質的直接檢測，包括SSCP、RFLP、HTX、DGGE、DC、DHPLC、測序等，這些方法各有其優缺點，有的需要昂貴的檢測設備，有的操作周期較長，需要2-3天才能出結果，不適合臨床開展TSHR突變檢測。

以熒光定量PCR為代表的基因擴增技術迅速發展，它具有快速、特異性、靈敏度高、成本相對低等優點，被廣泛應用于臨床檢測的各個方面。熒光定量PCR技術之所以由于常規PCR的最大原因是其引人了熒光探針，尤其是以近年來新推出TaqMan-MGB、TaqMan-LNA探針技術，這兩種技術能提高退火溫度，縮短引物探針長度，提高特異性，降低設計難度，因此多被用于一些SNP和高變異病原體的檢測等。

發明內容

本發明的目的在于提供一種突變位點檢測試劑盒、使用方法和應用，作為臨床對甲狀腺疾病的輔助診斷，為相關甲狀腺疾病的預防提供依據。

本發明一方面提供了一種促甲狀腺激素受體(TSHR)基因突變位點檢測試劑盒，所述試劑盒包括針對促甲狀腺激素受體蛋白623位點突變的TSHR?623體系和/或針對促甲狀腺激素受體蛋白631位點突變的TSHR?631體系：