[發明專利]促甲狀腺激素受體基因突變位點檢測試劑盒、使用方法和應用

有效

• 申請號: 201110322754.5
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102344966A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 丁鋼強;樓曉明;朱文明;朱旭平;朱勤瑋;邵俊斌
• 申請（專利權）人: 浙江省疾病預防控制中心;上海之江生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;G01N21/64
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種促甲狀腺激素受體基因突變位點檢測試劑盒，所述試劑盒包括針對促甲狀腺激素受體蛋白623位點突變的TSHR?623體系和/或針對促甲狀腺激素受體蛋白631位點突變的TSHR?631體系：

所述TSHR?623體系包括TSHR?623位點熒光PCR混合液、Taq酶、TSHR野生型陽性對照品、TSHR?623位點突變型陽性對照品；所述TSHR?623位點核酸熒光PCR混合液含有1)引物、2)623-野生型探針、3)623-突變型探針、4)RT-PCR?MIX、5)ddH2O；所述引物能特異性擴增包含TSHR蛋白623位點編碼基因在內的一段TSHR基因片段，所述623-野生型探針能特異性識別并結合未發生突變的TSHR蛋白623位點編碼基因，所述623-突變型探針能特異性識別并結合發生突變的TSHR蛋白623位點編碼基因；所述TSHR?631體系含有TSHR?631位點熒光PCR混合液、Taq酶、TSHR野生型陽性對照品、TSHR?631位點突變型陽性對照品；所述TSHR?631位點核酸熒光PCR混合液含有1)引物、2)631-野生型探針、3)631-突變型探針、4)RT-PCR?MIX、5)ddH2O；所述引物能特異性擴增包含TSHR蛋白631位點編碼基因在內的一段TSHR基因片段，所述631-野生型探針能特異性識別并結合未發生突變的TSHR蛋白631位點編碼基因，所述631-突變型探針能特異性識別并結合發生突變的TSHR蛋白631位點編碼基因；

所述探針均為熒光標記探針。

2.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述623體系與631體系的引物序列相同，擴增含TSHR蛋白623位點編碼基因和631位點編碼基因在內的一段TSHR基因片段。

3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述引物序列為SEQ?ID?NO：1～2。

4.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述TSHR?623體系的623-野生型探針序列為SEQ?ID?NO：3，所述623-突變型探針包括623-1型突變探針、623-2型突變探針和623-3型突變探針，探針序列分別為SEQ?ID?NO：4～6；所述TSHR?631體系的631-野生型探針序列為SEQ?ID?NO：7，所述631-突變型探針序列為SEQ?ID?NO：8。

5.如權利要求1或4所述的試劑盒，其特征在于，所述623-野生型探針和631-野生型探針的5’端連接有FAM熒光報告基團，3’端連接有非發光的淬滅基團；所述623-突變型探針和631-突變型探針的5’端連接有HEX熒光報告基團，3’端連接有非發光的淬滅基團。

6.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述TSHR?623體系的熒光探針為Taqman-MGB探針，所述TSHR?631體系的熒光探針為Taqman-MGB-LNA探針。

7.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述TSHR?623體系和TSHR?631體系的野生型陽性對照品為含有SEQ?ID?NO：9基因序列的質粒；所述TSHR?623位點突變型陽性對照品與TSHR?631位點突變型陽性對照品均為含有SEQ?ID?NO：10基因序列的質粒。

8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述質粒為pMD18-T。

9.如權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的擴增程序為37℃2min；94℃2min；93℃15sec、60℃60sec?40個循環。