[發明專利]日本血吸蟲重要抗原的高通量篩選及其在血吸蟲病診斷中的應用

有效

• 申請號: 201110322599.7
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN103059117A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 潘衛慶;徐新東
• 申請（專利權）人: 同濟大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;G01N33/68;C12N15/12;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/15;C12N1/19;C12N5/10;C12P21/02;C07K16/18;C07K1/14
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

技術領域

本發明屬于生物技術領域；更具體地，本發明公開了日本血吸蟲重要抗原的高通量篩選及其在血吸蟲病診斷中的應用，本發明還涉及一類血吸蟲陽性抗原，并提供這些抗原在血吸蟲病診斷和疫苗制備中的應用。

背景技術

血吸蟲病是一種嚴重威脅人類健康的人畜共患病，全球每年因血吸蟲病死亡人數約28萬。經過幾十年的努力，我國血吸蟲病防治工作取得了舉世矚目的成就，然而目前我國仍有現癥感染人群約50萬，尤其是目前大量人口流動，加之人們對血吸蟲病防范意識松懈，導致我國血吸蟲病防治形勢不容樂觀，防治任務依然艱巨。

血吸蟲的診斷是防治血吸蟲的重要前提和手段之一。精確的診斷技術不僅可以用于患者確診，還可用于劃分流行區等級、評估流行態勢和考核防控效果等。

目前血吸蟲病診斷方法主要有三種，一是病原學檢測方法，二是免疫學檢測方法，三是分子生物學檢測方法。病原學檢測方法主要包括蟲卵檢測法(Kato-Katz?Technique)和毛蚴孵化法(Hatching?Test)。免疫學檢測方法主要有間接紅血球凝集試驗(Indirect?Hemagglutination?Assay，IHA)、酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked?Immunosorbent?Assay，ELISA)、環卵沉淀試驗(Circum?Oval?Precipitating?Test，COPT)以及斑點免疫金滲濾試驗(Dotimmunogoldfiltration?Assay，DIGFA)。分子生物學方法是通過血吸蟲特異的核酸擴增技術來進行診斷。

以上三種方法各有優缺點：病原學檢測結果雖然目前仍然是血吸蟲病確診的金標準，但是病原學檢測敏感度低，費時費力，同時還有污染環境的危險。免疫學方法中的環卵沉淀試驗(COPT)和間接紅血球凝集試驗(IHA)特異性高，但敏感性低，不能廣泛使用。分子生物學的檢測方法敏感性高，但易出現假陽性，同時該方法對實驗條件要求較高，目前僅停留在實驗室研究階段，無法廣泛應用。

相比而言，ELISA技術具有操作簡單、敏感度高、易標準化等優點，并且廣泛應用在多種疾病診斷中，因此是血吸蟲病診斷優先發展的方向。ELISA技術的關鍵是抗原的選擇。目前市場上血吸蟲抗體診斷ELISA使用的抗原是蟲卵可溶性抗原(SEA)，但SEA是粗抗原，成分比較復雜，受個體生理和環境情況影響很大，使得SEA-ELISA的特異性較差，容易出現交叉反應，無法區分現癥感染和既往感染。此外，蟲卵可溶性抗原SEA通常要從動物肝臟中的蟲卵提取，檢測條件難以精確控制，且SEA-ELISA的方法成本較高，因此導致批次間的結果不穩定，無法產業應用。

利用基因工程技術生產重組蛋白是替代SEA的潛在新型抗原。重組抗原具有產量高、價格低、交叉反應少等優點，但抗原的選擇依然是制約產業應用的瓶頸。關鍵目前本領域內還沒有有效的、高敏感性、高特異性的抗原分子用作ELISA反應檢測血吸蟲。因此本領域迫切需要開發用于血吸蟲病診斷和防治的新靶標抗原分子。

發明內容

本發明的目的在于提供一類用于日本血吸蟲的陽性抗原及其用途。

本發明的另一目的在于提供一種高通量血吸蟲抗原的篩選方法。

本發明的另一目的在于提供一種血吸蟲病診斷試劑和試劑盒。

在本發明的第一方面，提供了一種血吸蟲陽性抗原，所述抗原選自：

(a)氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1-24所示的多肽：

(b)將SEQ?ID?NO：1-24氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；

(c)與SEQ?ID?NO：1-24所示氨基酸序列的同源性≥90％的、具有免疫原性的多肽；或

(d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。

在另一優選例中，所述抗原的氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1-8所示。

在另一優選例中，所述抗原用于制備檢測血吸蟲的試劑或試劑盒。

在本發明的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列選自下組：

(a)編碼如本發明第一方面所述陽性抗原的多核苷酸；

(b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。

在另一優選例中，所述多核苷酸編碼具有SEQ?ID?NO：1所示氨基酸序列的抗原。

在本發明的第三方面，提供了一種載體，所述載體含有本發明的第二方面所述的多核苷酸。