[發明專利]轉基因小麥B102-1-2的檢測方法

無效

• 申請號: 201110321456.4
• 申請日: 2011-10-20
• 公開（公告）號: CN102344963A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 曹際娟;徐君怡
• 申請（專利權）人: 曹際娟;徐君怡
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 劉曉琴

技術領域

本發明涉及一種轉基因小麥品系的鑒定方法。?

背景技術

轉基因小麥是利用基因工程技術，將外源基因導入小麥基因中，經過篩選得到的能夠表達目的基因的小麥。在基因轉移和表達研究中，需要對經轉化處理的幼苗進行分子檢測，以淘汰非轉化植株。選擇標記基因(如新霉素磷酸轉移酶基因、氯霉素乙酰轉移酶基因和潮霉素轉移酶基因等)和報告基因(如B2葡萄糖苷酸酶基因和熒光素酶基因等)已被廣泛用于轉化植株和組織的篩選，但在某些情況下，這種篩選效果不可靠。PCR是用于此目的檢測的常用技術之一，具有靈敏、快速的優點。對于此技術的應用在于尋找恰當的、特異性強的標記性基因片段，并以此為基礎設計相匹配的引物及擴增條件。?

發明內容

本發明的目的在于提供能準確快速地鑒定轉基因小麥B102-1-2的方法，所述的轉基因小麥B102-1-2的檢測方法，是通過PCR的方法檢測序列為SEQ?ID?NO：13的基因組件，該基因組件中包括序列為SEQ?ID?NO：17的邊緣序列。?

上述本發明的方法所述及的PCR擴增的引物對是SEQ?ID?NOS：7/8：?

B102-F1(SEQ?ID?NO：7)：GCGAGAGCCGCTGTATGTTC?

B102-R1(SEQ?ID?NO：8)：CGAGTAAATAATGCCAGCCTGT。?

容易理解，采用上述方法進行PCR擴增，如果擴增結果為陽性，則待測的小麥為轉基因小麥B102-1-2；如果擴增結果為陰性，則待測的小麥不是轉基因小麥B102-1-2。?

更為優選的技術方案中，PCR反應條件是?

94℃，1min，1個循環；?

98℃?10s，62℃?30s，72℃?30s，35個循環；?

72℃，7min，1個循環。?

本發明的轉基因小麥B102-1-2的檢測方法的最優技術方案是：?

采用50μLPCR反應體系，其中含有：待測樣品DNA，其濃度優選5ng/μL，10×LA?PCR?BufferII(Mg²⁺Plus)5ul，dNTP各0.4mM，堿基序列為SEQ?ID?NOS：7～8的PCR引物各0.2μM，Taq?DNA聚合酶0.05U/ul。?

采用本發明的方法可以快速、靈敏地實現對轉基因小麥B102-1-2的品系鑒定，該方法特異性強，靈敏度高，快速準確。?

附圖說明

本發明附圖3幅，?

圖1是實施例1以樣品C基因組DNA為模板擴增的1％瓊脂糖凝膠電泳圖，其中：M是DL2,000?DNA?Marker；1～6分別是ubiquitin、NOS、bar1、bar2、uidA和GAG56D。?

圖2是實施例1以樣品A、B、C基因組DNA為模板擴增的1％瓊脂糖凝膠電泳圖，其中：M1是λ-Hind?III?digest，M2是DL2,000?DNA?Marker，1～6分別是C-ubiquitin?F/Nos?R，C-ubiquitin?F/bar?R1，C-ubiquitin?F/uidA?R，A-ubiquitin?F/Nos?R，A-ubiquitin?F/bar?R1和A-ubiquitin?F/uidA?R。?

圖3是實施例1的1％瓊脂糖凝膠電泳圖，其中M：DL2,000?DNA?Marker。?

具體實施方式