[發明專利]β-葡聚糖GFPBW1及其制備方法和用途

有效

• 申請號: 201110321162.1
• 申請日: 2011-10-20
• 公開（公告）號: CN103059160A
• 公開（公告）日: 2013-04-24
• 發明（設計）人: 丁侃;王瀅;方建平;董群
• 申請（專利權）人: 中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;A61K31/716;A61P35/00;A61P35/02;A61P35/04
• 代理公司: 北京金信立方知識產權代理有限公司 11225
• 代理人: 朱梅;徐琳

技術領域

本發明涉及真菌提取多糖，更具體地說，涉及一種從灰樹花中提取得到的β-葡聚糖GFPBW1、其制備方法以及該β-葡聚糖在制備用于治療腫瘤的藥物中的用途。

背景技術

灰樹花(Grifola?frondosa(Fr.)S.F.Gray)(又名舞茸)是藥、食兼用蕈菌，屬擔子菌亞門層菌綱目多孔菌科樹花菌屬。野生的灰樹花主要產于日本，野生的灰樹花在封建社會時期的日本民間主要是由于其極佳的美味而用于烹調食材，直到上世紀八十年代，它的藥用價值才逐漸被日本學者所研究和發現?；覙浠ㄌ崛∥锞哂兄委烝IDS、糖尿病、高血壓等功能，而其中最主要的是其多糖具有通過增強免疫系統來達到抗腫瘤的作用。

由于多糖是極性大分子化合物，酸性條件下能引起多糖苷鏈的斷裂。它的提取分離十分復雜，大多采用沸水、堿溶液提取。提取液中的游離蛋白質主要用Sevage法、三氟乙酸法和三氟三氯乙烷法等三種方法去除。小分子雜質可用透析法除去。

多糖的純化方法很多，有分布沉淀法、鹽析法、金屬絡合法、季銨鹽沉淀法。DEAE-纖維素法和其他各種不同類型的凝膠柱層析法等，并采用硫酸-苯酚法等比色方法來測定多糖。

多糖最主要的功能是免疫調節功能。其中作為真菌細胞壁組分的β-葡聚糖作為一種典型的生物反應調節劑(BRM)，同時又作為一種病原相關分子模式(PAMP)，進入人體后，能夠被免疫細胞表面的模式識別受體(PRRs)所識別而激活信號傳導，并最終促進巨噬細胞、NK細胞、中性粒細胞以及CTL細胞的活化和增殖，從而實現對腫瘤細胞的細胞免疫清除。同時多糖還能通過誘導釋放細胞因子(如TNF-α)以及激活補體系統而對腫瘤細胞進行體液免疫清除。目前發現的識別β-葡聚糖的PRRs包括Dectin-1、補體受體3(CR3)、清道夫受體(Sc)、乳糖基神經酰胺受體(LacCer)以及Toll樣受體(TLRs)等，其中Dectin-1受體在β-葡聚糖的免疫調節過程中是最重要的受體。Dectin-1作為巨噬細胞的主要β-葡聚糖受體，在小鼠體內腹腔注射Dectin-1中和抗體后再給β-葡聚糖，結果表明β-葡聚糖的抗腫瘤效果大大降低甚至完全消失。而Dectin-1基因敲除小鼠也完全阻斷巨噬細胞對真菌的免疫反應以及β-葡聚糖誘導的TNF-α等細胞因子的釋放。Dectin-1作為一個II型跨膜C型凝集素受體家族成員，β-葡聚糖結合Dectin-1受體后通過幾條信號通路激活內吞，活性氧(ROS)產生，誘導細胞因子表達。其中主要一條信號通路是Dectin-1在結合配體后，細胞質內結構域中的酪氨酸被Src激酶磷酸化后，招募Syk激酶結合和活化，然后激活CARD9-BCL10-MALT1復合物，并進一步誘導激活NF-κB轉錄表達IL-2，TNF-α等細胞因子。同時，Dectin-1還能不依賴Syk的參與而行使巨噬細胞的吞噬功能以及依賴Syk的ROS釋放。

惡性腫瘤，也稱癌癥，是一種嚴重威脅人類健康的疾病，根據世界衛生組織WHO的統計，全球每年癌癥患者的死亡人數高達六千萬，繼心血管疾病、傳染性和寄生蟲病之后位居第三位，并且在2015年將屈居第二。對于癌癥的治療主要采用手術、放療以及化療。對癌癥患者的化療由于目前臨床上使用的烷化劑、抗代謝、抗生素等藥物的作用靶點在正常的細胞中也表達，靶向性不強，因而造成了很大的毒副作用，如骨髓抑制、免疫抑制、白細胞減少等血液系統毒性、嘔吐等胃腸道不良反應以及脫發等皮膚及附屬器官反應。因而人類一直在尋找新的藥物和治療方法意圖延長癌癥患者的存活期，提高他們的生活質量以致最終達到根除腫瘤的目的。利用多糖的免疫調節功能的免疫治療則由于靶向性強并且不容易產生副作用，近年來已經成為腫瘤治療的熱點，并且在未來的5-10年將有可能同傳統的手術、放療以及化療一道在腫瘤的治療中成為常用方法，同時鑒于腫瘤放療、化療經常導致的一些免疫抑制副作用，因而利用多糖的免疫增強功能并聯合放、化療來治療腫瘤將更有其臨床應用價值。

發明內容

本發明利用一種簡單有效的多糖提取工藝和方法，以灰樹花為原料獲得了一種新的均一的β-葡聚糖(GFPBW1)，藥理實驗表明GFPBW1能通過Dectin-1受體激活原代巨噬細胞釋放細胞因子，而體內抗腫瘤實驗也進一步表明GFPBW1具有免疫調節功能及相應的抗腫瘤活性。因此GFPBW1有望開發成為一種免疫調節劑作為抗腫瘤藥物或者輔佐藥物而用于臨床。

因此，本發明的一個目的在于提供一種化學結構特征明確的均一的β-葡聚糖GFPBW1。

本發明的另一個目的是提供一種制備GFPBW1方法。