[發(fā)明專利]一種利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導產(chǎn)生雷公藤毛狀根的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110320911.9
• 申請日: 2011-10-21
• 公開（公告）號: CN102321664A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設計）人: 封磊;宋萍;洪偉;吳承禎;陳敏捷
• 申請（專利權）人: 福建農(nóng)林大學
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H5/06
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導產(chǎn)生雷公藤毛狀根的方法，包括（1）無菌外植體的獲得；（2）發(fā)根農(nóng)桿菌菌液的制備；（3）農(nóng)桿菌侵染誘導毛狀根；（4）毛狀根離體培養(yǎng)體系的建立，其特征在于：所述毛狀根離體培養(yǎng)體系的建立，是在27±1℃暗培養(yǎng)條件下，將毛狀根置于含500mg/L頭孢噻肟鈉的1∕2MS固體培養(yǎng)基中大量培養(yǎng)，每7d繼代一次，繼代過程中逐漸降低頭孢噻肟鈉的使用濃度，直至無菌，最后將已完全無菌的毛狀根于1∕2MS固體培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)保存。

2.根據(jù)權利要求1所述利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導產(chǎn)生雷公藤毛狀根的方法，其特征在于：發(fā)根農(nóng)桿菌菌液的制備如下：發(fā)根農(nóng)桿菌活化后接種于含100mg/L卡那霉素的液體YEB培養(yǎng)基中，27±1℃黑暗條件下120-180r/min振蕩培養(yǎng)至OD₆₀₀=0.5-0.8，收集菌液，并將菌體在4℃條件下，8000r/min離心10分鐘，棄上清液，將菌體重懸于2倍體積的無菌1∕2MS液體培養(yǎng)基中。

3.根據(jù)權利要求1所述利用發(fā)根農(nóng)桿菌誘導產(chǎn)生雷公藤毛狀根的方法，其特征在于：農(nóng)桿菌浸染誘導毛狀根的方法為：將無菌外植體與發(fā)根農(nóng)桿菌菌液共同培養(yǎng)于1∕2MS液體培養(yǎng)基內(nèi)，加入識別信號因子乙酰丁香酮至150μmol/L，以促進其轉(zhuǎn)化，在120r/min，?27±1℃下振蕩處理30min后，取出浸染的外植體用無菌濾紙吸干，在27±1℃暗培養(yǎng)條件下，置于1∕2MS固體培養(yǎng)基中誘導毛狀根產(chǎn)生。