[發(fā)明專利]一種快速微量檢測鮮河鲀血液中TTX反相離子對HPLC法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110317505.7
• 申請日: 2011-10-19
• 公開（公告）號: CN102445509A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設計）人: 尹紹武;劉子列;何百彩
• 申請（專利權(quán)）人: 南京師范大學;揚中市河豚協(xié)會
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明屬于河鲀魚河鲀毒素檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及鮮河鲀毒素微量快速高效檢測技術(shù)與河鲀魚安全食用技術(shù)應用領(lǐng)域。

背景技術(shù)

我國現(xiàn)在食用的河鲀魚都屬于東方鲀（Takifugu），是鲀科（Tetrodantidae）的一個屬，該屬魚類全世界約有20余種，絕大多數(shù)分布于中、日近海，其肉味之美，有“魚中之王”的美譽，在我國沿海城市以及日本、韓國等地深受消費者歡迎，具有很高的經(jīng)濟價值。現(xiàn)已成為我國沿海地區(qū)的重要人工養(yǎng)殖對象。但因該魚類含有“河鲀毒素”（Tetrodoxin?TTX），但在其美味的誘惑下，連日本食用河鲀盛行、而且法規(guī)制度嚴格，每年仍有因吃河鲀中毒事件發(fā)生。我國民間早就有“拼死吃河鲀”的傳說，特別是在具有千百年飲食河鲀魚歷史文化、已成為我國最大的河鲀魚消費地，具有“河鲀之鄉(xiāng)”美譽的江蘇省揚中地區(qū)，也偶有誤食有毒河鲀而中毒事件發(fā)生。東方鲀屬魚類皆有毒性，但其毒力大小，不僅隨河鲀魚種類、個體、而且在河鲀魚不同組織器官，毒性皆有很大差別，河鲀魚的卵巢、肝臟（特別是繁殖期個體）、血液毒性最強，腸、精巢和皮膚次之，肌肉毒力最弱。因肌肉僅含微量毒素（<5mu/g?小鼠單位）的紅鰭東方鲀、假睛東方鲀、暗紋東方鲀、菊黃東方鲀等幾種則成為高經(jīng)濟價值的重要食用鲀類。河鲀毒素是一種毒性很強的神經(jīng)毒素，主要表征是TTX能過與鈉離子通道受體結(jié)合，阻斷電壓依賴性鈉通道，從而阻滯動作電位導致與之相關(guān)的生理活動障礙，主要是神經(jīng)肌肉麻痹。毒素作用于腦干、運動神經(jīng)、感覺神經(jīng)和植物神經(jīng)系統(tǒng)而引起中樞神經(jīng)、肌肉神經(jīng)、心血管和胃腸道功能障礙等臨床特征。呼吸中樞麻痹而導致突然呼吸停止是TTX致死的直接原因之一。目前還沒有有效的解毒劑。河豚毒素的化學性質(zhì)穩(wěn)定，一般的烹飪手段難以破壞。為了確保食用者的安全，同時又能享受河鲀美味佳肴，建立快速微量檢測河鲀中TTX的方法，可避免消費者食用有毒河鲀導致中毒的事件發(fā)生。

檢測河豚毒素方法很多各有其優(yōu)缺點，大致分為生物檢測法、儀器分析法、免疫化學法等，其中采用儀器檢測TTX分析法最多。但目前主要采用帶有熒光檢測器與柱后衍生的液相色譜儀與液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀的國家標準《水產(chǎn)品中河豚毒素測定液相色譜-熒光檢測法》和酶聯(lián)免疫法檢測的國家標準《鮮河豚魚中河豚毒素的測定》。因液-質(zhì)聯(lián)用的檢測方法，質(zhì)譜設備昂貴在國內(nèi)普及率不高，檢測成本很高（僅所需TTX標準品10mg，進口TTX?4500元/1mg,10mg量就需45000元），難以普及應用。酶聯(lián)免疫法特異性強、檢測靈敏高，但是檢測過程繁雜、周期長（需近2天工作日）、難以掌握、試劑盒成本高，也難以普遍推廣應用。由于現(xiàn)行采用的檢測方法主要采用河鲀魚肌肉與肝臟樣品，前處理過程復雜、耗時耗材、TTX回收率較低，而且在分析檢測時常受樣品中雜質(zhì)干擾，極易造成TTX假陽性結(jié)果，因而仍不能滿足實際應用的需求。

我國擁有豐富的河鲀魚類資源，為了保障食用者的安全，國家目前禁止河鲀魚的食用與銷售，僅在部分地區(qū)開設少數(shù)試食點，因而造成了這一資源的極大浪費。目前國際市場上河鲀的價格很高，因此國內(nèi)一些水產(chǎn)部門迫切希望開放河鲀魚的經(jīng)營，同時國內(nèi)人工養(yǎng)殖河鲀的規(guī)模也很大，因此迫切需要修訂、完善原有管理辦法，做到既發(fā)揮河鲀資源在促進經(jīng)濟發(fā)展中的作用，又保障消費者的身體健康。因此，急需建立一種先進的以科學、可靠、簡便、快速、經(jīng)濟、實用為基礎的河鲀毒素檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明克服了河鲀魚血液樣品難以采集的技術(shù)難題；建立一種新的快速微量檢測鮮河鲀血液樣品中河鲀毒素（Tetrodoxin?TTX）含量的反相離子對高效液相色譜法；利用該法檢測結(jié)果判斷鮮河鲀是否可以安全食用。為河鲀魚的安全食用等方面提供了科學依據(jù)和新的檢測手段。

本發(fā)明的目的在于改進傳統(tǒng)的僅以河鲀魚肌肉與肝臟作為檢測TTX樣品的方法，而以河鲀魚血液作為檢測TTX樣品，減化樣品前處理耗時耗材的操作步驟，減少檢測成本，不需高昂的檢測設備，達到適用于基層檢測中心高效快速微量檢測TTX目的。為河鲀魚的安全食用提供準確定性定量依據(jù)。