[發明專利]一種用于沙門菌快速檢測的Nano/ALISA方法和試劑盒

無效

• 申請號: 201110315673.2
• 申請日: 2011-10-09
• 公開（公告）號: CN102565389A
• 公開（公告）日: 2012-07-11
• 發明（設計）人: 呂建新;吳文鶴;張杰
• 申請（專利權）人: 溫州醫學院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/532;G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測方法，其特征在于，依次包括以下步驟：

(1)將沙門菌的特異適配體修飾到磁性顆粒表面；

(2)加入標本進行反應；

(3)加入沙門菌的特異一抗進行反應；

(4)加入二抗-納米金-報告基團的偶聯體進行反應；

(5)加入特異性底物進行反應，或直接記錄此時的光信號。

2.根據權利要求1所述的基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測方法，其特征在于，首次提出了以適配體、病原菌和納米金構成三明治結構以用于特異性檢測病原菌的新型免疫學方法。

3.根據權利要求1所述的基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述納米金的粒徑為15～20nm。

4.根據權利要求1所述的基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述報告基團為能催化底物生成具有顏色或熒光信號的酶，或具有自發光性能的熒光蛋白。

5.根據權利要求1所述的基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述二抗-納米金-報告基團的偶聯體的制備方法包括下列步驟：

(1)將二抗和報告基團按一定比例混合，加入到納米金溶液中，調節pH值，37℃振蕩孵育10min，4℃靜置過夜；

(2)加入封閉液封閉納米金表面的空余的結合位點；

(3)離心洗滌去除未結合物質；

(4)加儲存液混勻，置于4℃保存。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征是步驟(1)所述的二抗和報告基團的摩爾數分別為納米金的50～100倍和200～400倍，pH值為8.0～9.0。

7.根據權利要求5所述的制備方法，其特征是步驟(3)所述的離心條件為12000rpm離心20min。

8.根據權利要求5所述的制備方法，其特征是步驟(3)和(4)所述的洗滌液和儲存液組成為0.5％牛血清白蛋白2.5％蔗糖，0.1％PEG，10mM?PBS(pH7.4)。

9.一種基于Nano/ALISA技術的沙門菌快速檢測試劑盒，其特征在于，試劑盒中含有：

(1)特異適配體修飾的磁性顆粒，其粒徑約1～1.5μm，濃度約為5mg?ml^-1；

(2)沙門菌的特異一抗，最適濃度2μg?ml^-1；

(3)二抗-納米金-報告基團的偶聯體，最佳稀釋度為1∶10；

(4)封閉液，其組分為含有1％BSA的10mM?PBS(pH?7.4)溶液；

(5)洗滌液，其組分為含有0.05％?Tween?20的10mM?PBS(pH?7.4)溶液；

(6)底物，納米金偶聯體中報告基團相對應的底物，如3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺(3，3′，5，5′-tetramethylbenzidine，TMB)等；

(7)陽性對照菌液和陰性對照菌液；

(8)說明書。