[發明專利]一種篩選抗HSV-1藥物的試劑盒和方法

無效

• 申請號: 201110314235.4
• 申請日: 2011-10-15
• 公開（公告）號: CN102363805A
• 公開（公告）日: 2012-02-29
• 發明（設計）人: 陳恬;曾南;陳洪宇;李學東;何婷
• 申請（專利權）人: 成都醫學院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/44;C12N15/55;C12N15/63;C12N9/22
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽

1.一種用于篩選抗單純皰疹病毒I型藥物的試劑盒，其特征在于：包 含獨立包裝的單純皰疹病毒I型堿性核酸酶、堿性緩沖液、MgCl₂和核酸。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述單純皰疹病毒I 型堿性核酸酶濃度為0.5～0.7mg/ml、堿性緩沖液濃度為40～60mM、MgCl₂濃度為2～4mM、核酸濃度為1.4～1.6μg/ml。

3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于：所述單純皰疹病毒I 型堿性核酸酶濃度為0.64mg/ml、堿性緩沖液濃度為50mM、MgCl₂濃度為 3mM、核酸濃度為1.516μg/ml。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述單純皰疹病毒I 型堿性核酸酶是以如下方法得到的：

(1)擴增目的基因：提取單純皰疹病毒I型病毒基因組作為模板，以 SEQ?ID?NO：1～2所示的核苷酸序列作為引物擴增HSV-1的UL12基因片 段，擴增程序為：96℃預變性3min，95℃變性40s，68℃～72℃退火延伸 2min30s，31個循環，72℃延伸10min；膠回收擴增的UL12基因片段；

(2)構建重組質粒：將獲得的UL12基因片段與表達質粒連接，獲得 重組表達質粒；

(3)誘導表達：將步驟(2)獲得的重組表達質粒轉化大腸桿菌；培 養含有重組表達質粒的大腸桿菌使其復制至處于對數期；加入異丙基2b-D2 硫代半乳糖苷酶誘導表達；離心收集菌體；

(4)變性：破碎步驟(3)獲得的菌體，離心收集沉淀，用包含變性 劑的洗滌液洗滌沉淀，獲得蛋白溶液；

(5)復性：用復性液復性步驟(4)獲得的蛋白溶液，獲得活性蛋白。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟(1)擴增 目的基因的方法為：提取單純皰疹病毒I型病毒基因組作為模板，以SEQ?ID NO：1～2所示的核苷酸序列作為引物擴增HSV-1的UL12基因片段，擴增 程序為：96℃預變性3min，95℃變性40s，68℃～72℃退火延伸2min30s， 31個循環，72℃延伸10min；膠回收擴增的UL12基因片段；將擴增得到 的UL12基因片段與T載體連接形成重組T載體，再以該重組T載體為模 板，以SEQ?ID?NO：1～2所示的核苷酸序列作為引物進一步擴增得到核苷 酸序列如SEQ?ID?NO：3所示的UL12目的基因片段，擴增條件不變。

6.根據權利要求4或者5所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟(1) 中退火、變性溫度為68℃。

7.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟(2)中表 達質粒為pET系列質粒。

8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于：所述表達質粒為 pET32a-UL12或者pET28a-UL12質粒。

9.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于：所述步驟(3)中大 腸桿菌為E.coli?BL12菌株或者為E.coli?Rosetta菌株。