[發(fā)明專利]一種檢測正畸牙根吸收的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110308602.X
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102507707A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發(fā)明（設計）人: 張君;王媛
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N5/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發(fā)明提供了一種檢測正畸牙根吸收的方法。

背景技術

正畸牙根吸收的發(fā)病率高，嚴重的牙根吸收可引起牙根尖不可復性變短變鈍，從而導致牙齒冠根比失調，牙齒松動，甚至脫落。目前對于牙根吸收尚無有效的治療方法，只能通過早期發(fā)現(xiàn)、去除病因，從而防止其進一步發(fā)展。蛋白裂解酶參與降解包括骨在內的全身各種組織的細胞外基質，齦溝液是牙齦溝中的滲出液，其成分隨著周圍組織的變化而改變，其中包括齦溝液蛋白裂解酶。通過檢測齦溝液中某些物質的改變來診斷疾病、監(jiān)測病程、了解治療效果已被口腔科醫(yī)師廣泛應用。

發(fā)明內容

針對上述現(xiàn)有技術，本發(fā)明的發(fā)明人進行了相關的研究，研究表明齦溝液蛋白裂解酶是參與牙周組織改建的主要酶類，與牙根吸收有關，因此，本發(fā)明提供了一種檢測正畸牙根吸收的方法。

本發(fā)明是通過以下技術方案實現(xiàn)的：

一種檢測正畸牙根吸收的方法，步驟如下：

(1)齦溝液的提取：清潔待檢測者的牙面，棉球隔濕，吹干，然后將事先經紫外線消毒的20#吸潮紙尖緊貼于牙的頰舌側牙面的齦溝邊緣，放置30秒，取出后立即放入Ep管密封，-70℃保存，待用；如果發(fā)現(xiàn)紙尖上有血污染，則棄之重取；每隔一周取樣一次，至少取兩次；

(2)齦溝液重量的測量：用電子分析天平分別稱量齦溝液提取前吸潮紙尖和Ep管的重量及其提取齦溝液后的重量，兩者相減即得齦溝液的重量，即：齦溝液的重量＝提取齦溝液后(吸潮紙尖+Ep管)的重量-(吸潮紙尖+Ep管)的重量；

(3)蛋白質提取：向上述裝有齦溝液的Ep管中加入20μl蛋白提取液，冰浴20-30min，4℃下15000r/min離心10分鐘后，提取20μl上清液，加等體積的蛋白上樣液，煮熟5min，得蛋白液，-20℃保存；

(4)蛋白質SDS-PAGE凝膠電泳：上述蛋白液進行SDS-PAGE凝膠電泳，然后固定染色；

(5)蛋白印跡：上述凝膠電泳完畢后，取下凝膠，用硝酸纖維素膜進行蛋白印跡，然后用標記的二抗與之反應并進行顯影(為常規(guī)技術常規(guī)操作)，顯示膜上的蛋白條帶，測量條帶的光密度和面積，通過：蛋白裂解酶的蛋白質含量＝條帶的平均光密度×條帶的面積，計算蛋白裂解酶的含量；

(6)數(shù)據(jù)處理：根據(jù)上述測得的齦溝液重量計算相應的單位重量齦溝液的酶含量，使用SPSS11.0統(tǒng)計包，對GCF重量及酶含量進行統(tǒng)計學分析(配對T檢驗)，該分析結果可以作為醫(yī)生診斷或治療所需的中間參數(shù)之一(并非為疾病的診斷方法，其只能作為一個因素，由醫(yī)生進行參考)，有以下三種方式：A.分析其數(shù)據(jù)變化趨勢，若GCF重量及酶含量為上升趨勢，則代表待檢測者的牙根吸收有加重的趨勢，若GCF重量及酶含量為下降趨勢，則代表待檢測者的牙根吸收有減輕的趨勢；B.將該分析結果與標準數(shù)據(jù)(標準數(shù)據(jù)是指檢測無牙根吸收者所得到的統(tǒng)計學數(shù)據(jù))比較，若GCF重量及酶含量較標準數(shù)據(jù)高(有統(tǒng)計學意義)，則代表待檢測者患有牙根吸收，若與標準數(shù)據(jù)相同(無顯著差異)，則代表待檢測者無牙根吸收；C：在步驟(1)中同時設對照組，對照組選擇無牙根吸收者，對實驗組和對照組所得到的數(shù)據(jù)進行比較，若GCF重量及酶含量較對照組高(有統(tǒng)計學意義)，則代表待檢測者患有牙根吸收，若與對照組相同(無顯著差異)，則代表待檢測者無牙根吸收。三種方式可以單獨使用，也可以結合使用。

所述步驟(3)中，蛋白提取液的配方為：50mmol?pH7.5的Tris-CL，150mmol?NaCl，1mmolEDTA，1mmol?Na₃VO₄(正釩酸鈉)，1％(體積比)NP-40，10％(體積比)Glycerol(丙三醇)，50mmol?NaF，1mmol?PMSF(蛋白酶抑制劑)；各組分混合即可。

本發(fā)明的方法可用于評價和篩選牙根吸收的敏感人群；評價正畸治療前的牙根吸收的發(fā)生狀態(tài)；動態(tài)監(jiān)控正畸治療中牙根吸收的發(fā)展與轉歸，以采取有效的措施防止牙根吸收的發(fā)生和發(fā)展。

具體實施方式

下面結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明。

實施例1檢測大鼠牙根吸收實驗

試驗方法為：

1)建立大鼠牙根吸收模型，12周齡，wistar大鼠，分實驗側和對照側兩組(20只大鼠，采用自身對照的方式，分對照側和實驗側))。

1)20#吸潮紙尖紫外線消毒后備用。