[發明專利]一種檢測正畸牙根吸收的方法

有效

• 申請號: 201110308602.X
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102507707A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 張君;王媛
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N5/02
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

1.一種檢測正畸牙根吸收的方法，其特征在于，步驟如下：

(1)齦溝液的提取：清潔待檢測者的牙面，棉球隔濕，吹干，然后將事先經紫外線消毒的20#吸潮紙尖緊貼于牙的頰舌側牙面的齦溝邊緣，放置30秒，取出后立即放入Ep管密封，-70℃保存，待用；每隔一周取樣一次，至少取兩次；

(2)齦溝液重量的測量：分別稱量齦溝液提取前吸潮紙尖和Ep管的重量及其提取齦溝液后的重量，兩者相減即得齦溝液的重量；

(3)蛋白質提取：向上述裝有齦溝液的Ep管中加入20μl蛋白提取液，冰浴20-30min，4℃下15000r/min離心10分鐘后，提取20μl上清液，加等體積的蛋白上樣液，煮熟5min，得蛋白液，-20℃保存；

(4)蛋白質SDS-PAGE凝膠電泳：上述蛋白液進行SDS-PAGE凝膠電泳，然后固定染色；

(5)蛋白印跡：上述凝膠電泳完畢后，取下凝膠，用硝酸纖維素膜進行蛋白印跡，然后用標記的二抗與之反應并進行顯影，顯示膜上的蛋白條帶，測量條帶的光密度和面積，通過：蛋白裂解酶的蛋白質含量＝條帶的平均光密度×條帶的面積，計算蛋白裂解酶的含量；

(6)數據處理：根據上述測得的齦溝液重量計算相應的單位重量齦溝液的酶含量，使用SPSS11.0統計包，對GCF重量及酶含量進行統計學分析。

2.根據權利要求1所述的檢測正畸牙根吸收的方法，其特征在于：所述步驟(3)中，蛋白提取液的配方為：50mmol?pH7.5的Tris-CL，150mmol?NaCl，1mmol?EDTA，1mmolNa₃VO₄，1％NP-40，10％Glycerol，50mmol?NaF，1mmol?PMSF；各組分混合即可。