[發明專利]用于促進細胞增殖的蝎毒多肽及其制備方法和藥用用途

無效

• 申請號: 201110307794.2
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102399279A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 董偉華;孔天翰;王燕;鄭躍錢;邱軼芳;王彩霞;蔣麗苑;李婷;邢百倩
• 申請（專利權）人: 廣州醫學院
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/17;A61P7/06
• 代理公司: 廣州廣信知識產權代理有限公司 44261
• 代理人: 張文雄

技術領域

本發明涉及用于促進細胞增殖的蝎毒多肽及其制備方法和藥用用途，是從東亞鉗蝎(Buthus?martensii?Karsch)蝎毒中分離得到一種新的多肽——蝎毒增殖肽(Scorpion?Venom?proliferative?Peptide?from?Buthus?martensii?Karsch，BmKpp)，該多肽具有促進造血細胞(正常/輻射后)增殖的作用。屬于生物技術領域。

背景技術

全世界蝎目分6科，70屬，約800余種，中國境內主要為東亞鉗蝎，后者在歷史上一直作為我國傳統、名貴中藥之一的“全蝎”而享譽海內外。蝎毒為蝎尾節毒囊中排泌出來的一種有毒分泌物，是全蝎治療疾病的主要有效部位，其對腫瘤、疼痛、心血管疾病的療效較全蝎強數倍。蝎毒以毒攻毒的藥理作用是建立在全蝎及蝎尾千百年來大量臨床應用的基礎之上，具有鮮明的民族特色。

蝎毒是一個巨大的生物資源寶庫，其中大部分是具有藥理學活性的多肽類。目前，蝎毒中已分離出的蝎毒素大約有30種左右，主要是由35～70個氨基酸所組成的短肽，分子量約在4000～9000D之間，pH變化對蝎毒素的毒性影響不大，在加熱至100℃并持續15～30min后，毒性依然較強。國外在蝎毒方面的研究始于十九世紀末，自上個世紀九十年代以來，蝎毒作為研究離子通道的工具及制作抗毒血清的原料而成為國際上研究的重點。從LQS蝎毒中分離出的氯毒素及charybdotoxin，對惡性神經膠質瘤細胞膜上的離子通道有特異的親和作用，細胞的惡性度越高，氯毒素對它們的親和作用越強。氯毒素與同位素結合后，其對膠質瘤的定向殺傷作用更為顯著。此外，蝎毒素能夠阻滯細胞膜的K⁺通道，同時導致Ca²⁺的內流減少，使腫瘤細胞的生長延緩。

我國在蝎毒方面的研究雖然起步晚，但在中醫臨床驗證及理論體系(攻毒散結、通經活絡、平肝熄風)的指導下，在抗腫瘤、抗痛、抗癲癇、抗凝、抗肝炎、抗風濕等領域均取得了豐碩的成果。

目前，國內外對蝎毒及其毒素(單一成分的純品)抑制細胞生長的細胞生物學效應及作用機理有較多的研究，而對于其促進細胞增殖和防護細胞應激性損傷(輻射等)等方面尚無類似報道。

在以往的研究中，我們利用凝膠過濾層析技術，從東亞鉗蝎(Buthus?martensii?Karsch，BMK)蝎毒中分離得到了蝎毒多肽(Scorpion?Venom?Polypeptide，SVP)，并利用離子交換層析技術從SVP中進一步分離得到了有效組分——SVP?IV和SVP?V。實驗表明，SVP?IV和SVP?V對輻射后小鼠的骨髓有核細胞數、骨髓粒單系祖細胞集落形成單位(CFU-GM)數量、骨髓基質細胞集落數、脾結節數、骨髓細胞的增殖指數等均有升高的促進作用。其中，SVP?IV促進造血細胞增殖的作用明顯優于SVP?V，而且前者應用30分鐘后，還可促進小鼠骨髓細胞磷酸化STAT3蛋白表達水平明顯升高(參考文獻1-3)。上述的研究結果已被國外的研究者引用Salman(參考文獻4)。Salman發現，全身輻射后的雄性豚鼠注射了從蝎毒(Buthus?occitanus)中分離的緩激肽激活因子(bradykinin?potentiating?factor，BPF)后，血清總蛋白和白蛋白的水平均提高，認為從蝎毒中分離的BPF能夠促進生長因子和/或生長激素的分泌，進而增加肝臟蛋白質的合成，減輕輻射損傷作用。說明蝎毒多肽在促進細胞增殖和防護細胞應激性損傷(輻射等)的藥物開發方面具有重要的意義。

在實驗中，申請人發現從SVP?IV中進一步純化出的單一毒素純品——蝎毒增殖肽(Scorpion?Venom?proliferative?Peptide?from?Buthus?martensii?Karsch，BmKpp)，在促進造血細胞(正常/輻射)增殖方面較SVP?IV具有更顯著的生物學活性。

發明內容

本發明的目的之一，是為了提供一種用于促進細胞增殖的蝎毒多肽，該用于促進細胞增殖的蝎毒多肽是從東亞鉗蝎(Buthus?martensii?Karsch)蝎毒中分離一種新的蛋白質。

本發明的目的之二，是為了提供一種用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法。

本發明的目的之三，是為了提供一種用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的藥用用途。

本發明的目的之一可以通過采取如下技術方案達到：