[發明專利]用于促進細胞增殖的蝎毒多肽及其制備方法和藥用用途

無效

• 申請號: 201110307794.2
• 申請日: 2011-10-12
• 公開（公告）號: CN102399279A
• 公開（公告）日: 2012-04-04
• 發明（設計）人: 董偉華;孔天翰;王燕;鄭躍錢;邱軼芳;王彩霞;蔣麗苑;李婷;邢百倩
• 申請（專利權）人: 廣州醫學院
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/17;A61P7/06
• 代理公司: 廣州廣信知識產權代理有限公司 44261
• 代理人: 張文雄

1.用于促進細胞增殖的蝎毒多肽，其特征是：從東亞鉗蝎Buthus?martensii?Karsch蝎毒中分離、純化而成，所述用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的N端66個氨基酸殘基的序列如序列表SEQ?ID№：1所示，其分子量為7217.4Da。

2.如權利要求1所述用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法，其特征在于它包括以下步驟：

1)采集東亞鉗蝎蝎毒，從東亞鉗蝎體內提取新鮮毒液后，通過真空冷凍干燥成凝膠，備用；

2)從第1)步制的凝膠中分離出蝎毒多肽有效組分SVP?IV，首先進行凝膠過濾：采用分子篩層析凝膠，即從蝎毒粗毒溶液進行層析分離出峰II，收集峰II凍干，備用；然后進行離子交換及純化：采用填料CM?Sepharose?FF，通過離子凝膠柱對前述峰II進行離子交換、即作進一步純化，用ph＝6.4的磷酸鹽緩沖液作為洗脫液進行梯度洗脫后，收集蝎毒多肽有效組分SVP?IV，再用切向超濾器VIVAFLOW?50對所收集的蝎毒多肽有效組分SVP?IV脫鹽、凍干，備用；

3)取得蝎毒增殖肽BmKpp，首先進行離子交換：采用CM?Sepharose?FF填料，通過離子凝膠柱對第2)步形成的蝎毒多肽有效組分SVP?IV進行進一步純化，用洗脫液為ph＝6.4的磷酸鹽緩沖液進行梯度洗脫，收集目標峰，用VIVAFLOW?50切向超濾器脫對所述目標峰進行脫鹽、凍干，取得蝎毒增殖肽BmKpp；然后用HPLC分析得知，由離子交換所得的目標峰的BmKpp純度達95％以上。

4)測定蝎毒增殖肽BmKpp的分子量及其氨基酸序列，用質譜分析法測定蝎毒增殖肽BmKpp的精確分子量為7217.4Da，用埃德曼降解法Edman?degradation測定蝎毒增殖肽BmKpp的N端66個氨基酸殘基的序列如序列表SEQ?ID№：1所示。

3.如權利要求2所述的用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法，其特征在于：前述第2)步中所用分子篩層析的層析柱規格為50cm×5.5cm，所用離子凝膠柱規格為100cm×5.5cm，所述洗脫液由A液和B液組成，其中A液為0.05M磷酸鹽緩沖液，該磷酸鹽緩沖液的分子式Na₂HPO₄/NaH₂PO₄，B液為含0.3M的A液。

4.如權利要求2所述的用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法，其特征在于：前述第3)步中所用離子凝膠柱規格為50cm×5.5cm，所述洗脫液由A液和B液組成，其中A液為0.05M磷酸鹽緩沖液，該磷酸鹽緩沖液的分子式為Na₂HPO₄/NaH₂PO₄，B液為含0.3M的A液。

5.如權利要求2所述的用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法，其特征在于：前述第3)步所用HPLC分析過程中，采用流動相A液為0.1％TFA/H₂O，B液為70％乙腈+0.1％TFA；洗脫程序為0～60min，B液濃度由0～100，洗脫速度為0.5ml/min。

6.如權利要求2所述的用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的制備方法，其特征在于：前述第4)步所用質譜分析法，為Bruker公司的9.4T混合型串聯傅立葉質譜Q-FT-MS法。

7.如權利要求1所述用于促進細胞增殖的蝎毒多肽的藥用用途，其特征在于：

1)用于促進正常造血細胞增殖作用；

2)用于促進輻射后骨髓造血細胞增殖。