[發(fā)明專利]一種豬TLR4基因T611A堿基突變的檢測方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110307720.9 | 申請日： | 2011-10-10 |
| 公開（公告）號： | CN102399868A | 公開（公告）日： | 2012-04-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 方曉敏;劉筱;任守文;孟翠;李碧俠;王學敏 | 申請（專利權）人： | 江蘇省農(nóng)業(yè)科學院 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 南京經(jīng)緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 張素卿 |
| 地址： | 210014*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 tlr4 基因 t611a 堿基 突變 檢測 方法 | ||
1.一種豬TLR4基因T611A堿基突變的檢測方法，其特征在于如下步驟：
步驟一，據(jù)GenBank數(shù)據(jù)庫豬TLR4基因序列設計特異引物：
正義引物5′-TTTCTAACCTGCCCAACCTG-3′
反義引物5′-GAACCAGCCAGACCTTGAAT-3′
應用上述引物對待檢測豬模板cDNA進行PCR擴增；
步驟二，對特異性擴增產(chǎn)物進行分離、純化，獲得特異核酸；
步驟三，對分離純化的擴增產(chǎn)物進行序列測定、比對分析，得出待檢豬TLR4基因是否存在T611A單核苷酸堿基突變。
2.根據(jù)權利要求1所述一種豬TLR4基因T611A堿基突變的檢測方法，其特征在于：
PCR擴增反應體系12μl：10×PCR?buffer?1.2μl，2mM/L?dNTPs?1.2μl，25mM/L?MgCl20.8μl，10pmol/μl?primer?1.0μl，5U/μl?Taq?polymerase?0.2μl，50ng/μl?DNA0.8μl，ddH2O?6.8μl；
反應條件：94℃預變性5min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸1min，34個循環(huán)；72℃延伸8min；
其中，擴增片段長度為247bp。
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