[發明專利]檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的引物和探針、實時熒光定量PCR方法及試劑盒

無效

• 申請號: 201110307502.5
• 申請日: 2011-10-11
• 公開（公告）號: CN102312013A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 王長軍;朱靜;張錦海;胡丹;潘秀珍;唐家琦
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍南京軍區軍事醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 何朝旭

技術領域

本發明涉及一種檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的引物和探針、實時熒光定量PCR方法及試劑盒，屬于生物工程技術領域。?

背景技術

豬鏈球菌(Streptococcus?suis，S.suis)為革蘭陽性兼性厭氧球菌，根據莢膜多糖的抗原性，豬鏈球菌可分為35個血清型，其中1、2、1/2、7、9和14型具有致病性，并以2型(S.suis?2)毒力最強，臨床檢出率最高。?

2型豬鏈球菌是一種重要的人畜共患傳染病病原體，不僅可導致豬急性敗血癥、腦膜炎、關節炎、心內膜炎及急性死亡，還可通過傷口和呼吸道等傳播途徑，導致人的感染發病和死亡。2型豬鏈球菌呈全球性分布，不僅給全世界養豬業造成巨大的經濟損失，而且對相關從業人員的健康亦構成嚴重威脅，已成為重要的新發傳染病病原體。2型豬鏈球菌根據致病力的強弱可分為強毒株，弱毒株或無毒株。然而，弱毒株或無毒株2型豬鏈球菌在健康豬扁桃體的帶菌率可高達42.6％，這就給病豬診斷和肉品檢測帶來困難——在檢疫檢驗時，檢到2型豬鏈球菌后還必須鑒定其致病力，進而采取針對性的應對措施，從而防止疫情爆發和蔓延。?

本專利申請人已針對2型豬鏈球菌主要毒力因子(CPS2、MRP、EF、Sly)建立了多重常規PCR體系檢測2型豬鏈球菌，并研制出相應的試劑盒，在國內率先提供快速診斷的技術手段(研究成果發表在《中華流行病學雜志》2005年9月第26卷第九期)。?

通常，2型豬鏈球菌在人群中只引起散發的急性腦膜炎和敗血癥。然而，1998年在江蘇省以及2005年在四川省大規模爆發的兩起2型豬鏈球菌感染人的突發公共衛生事件共導致了240人感染，52人死亡，病人出現鏈球菌中毒性休克綜合征(STSS)的新臨床型別，該型別患病致死率高達80％以上，為歷史罕見。?

本專利申請人率先對來自中毒休克綜合癥臨床病人的1998年江蘇分離株(98HAH12)和2005年四川分離株(05ZYH33)分別作了全序列基因測定，經對比分析，在全世界首次發現這兩個中國強毒株比歐洲株多出一段89K序列片段，稱為89K毒力島(王長軍，A?Glimpse?of?Streptococcal?Toxic?Shock?Syndrome?from?Comparative?Genomics?of?S.suis?2?Chinese?Isolates.PLoS?ONE，2007，Issue5，1-9)。本專利申請人在后續研究中發現，該89K毒力島對菌株毒力因子起到全局性的調控作用(王長軍，Inactivation?of?Dipeptidyl?Peptidase?IV?Attenuates?the?Virulence?of?Streptococcus?suis?Serotype?2?that?Causes?Streptococcal?Toxic?Shock?Syndrome.Curr?Microbiol，2009，1-8)。在敲除89K毒力島基因后，菌株的致病性顯著降低，宿主癥狀顯著改善，存活率顯著提高(王長軍，SalK/SalR，a?Two-Component?Signal?Transduct?ion?System，Is?Essential?for?Full?Virulence?of?Highly?Invasive?Streptococcus?suis?Serotype?2.PLoS?ONE，2008，Volume3，Issue5，1-12)。上述研究表明，89K毒力島應是這兩次流行2型豬鏈球菌的一種重要致病基因，是引起我國人感染豬鏈球菌病中毒性休克綜合癥的關鍵致病基因。?

含有89K毒力島的2型豬鏈球菌的致病力遠遠超過傳統的強毒株2型豬鏈球菌，但目前還沒有一種能檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的技術手段，而這種技術手段對于應對由含89K毒力島2型豬鏈球菌引起的傳染病，特別是在中國突發公共衛生事件中早期應急處置由含89K毒力島2型豬鏈球菌導致的疫情，進而抑制疫情爆發和蔓延具有重要的意義。?

發明內容

本發明的第一目的是：針對現有技術存在的問題，提供一種檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的引物和探針。?

本發明的第二目的是：提供一種檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的實時熒光定量PCR方法。?

本發明的第三目的是：提供一種檢測2型豬鏈球菌89K毒力島基因的試劑?盒。?

申請人經研究發現，2型豬鏈球菌89K毒力島的二元信號轉導系統基因SalK和IV型分泌系統毒力基因virB4-89K均對2型豬鏈球菌的致病力起到關鍵的調節作用。?