[發明專利]白靈菇與杏鮑菇雜種的分子標記鑒定方法

無效

• 申請號: 201110306047.7
• 申請日: 2011-10-11
• 公開（公告）號: CN102312012A
• 公開（公告）日: 2012-01-11
• 發明（設計）人: 劉新銳;謝寶貴;吳小平;江玉姬;徐美玲;鄧優錦;朱堅
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種白靈菇與杏鮑菇雜種的分子標記鑒定方法，包括白靈菇與杏鮑菇親本菌株選擇、原生質體制備、原生質體融合、菌絲的培養與收集、基因組DNA的提取、ITS-PCR擴增、特異酶切片段標記的產生和酶切產物的電泳檢測；其特征在于：

（1）特異酶切片段標記的產生：在8～12?μL?ITS-PCR擴增產物,?加入2μL?EcoO109I酶的酶切Buffer，0.8～1.2?μL?EcoO109I酶,?5～?9.8μL?ddH₂O，37℃水浴4～7?h；所述EcoO109I酶的酶切Buffer成份為100mmol/L??Tris-HCl,??pH7.5，100mmol/L??MgCl₂，10?mmol/L??Dithiothreitol；

（2）酶切產物的電泳檢測：取EcoO109I酶的酶切產物15μL，與3μL上樣緩沖液混勻，點樣于1.2%的瓊脂糖凝膠上，于0.5?X?TBE緩沖液中，5V/cm電壓下電泳；經電泳檢測，在一個泳道上只有同時出現分子量為675～685bp、435～445?bp和235～245bp的DNA標記條帶，是白靈菇與杏鮑菇雜交種的標記；所述上樣緩沖液：0.1％?溴酚藍,?40%?蔗糖。