[發(fā)明專利]直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法及應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110304493.4
• 申請日: 2011-10-09
• 公開（公告）號: CN103031335A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發(fā)明（設計）人: 李川源;劉新建;李芳;黃倩
• 申請（專利權）人: 李川源;黃倩
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C12N5/10
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，其包括步驟：

1)選擇誘導人成纖維細胞轉變成能產生多巴胺的神經細胞的轉錄因子及其組合；

2)構建攜帶轉錄因子病毒載體及介導轉錄因子轉移；

3)將步驟2)的病毒載體感染人成纖維細胞及多巴胺樣神經細胞的鑒定。

2.按權利要求1所述的直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，所述步驟1)的轉錄因子及其組合是，Mash1，Ngn2，Sox2，Nurr1，Pitx3，Lmx1A，Lmx1B和EN1及其組合。

3.按權利要求1所述的直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，所述步驟1)的轉錄因子及其組合是Mash1，Ngn2，Sox2，Nurr1和Pitx3的組合。

4.按權利要求1所述的直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，所述步驟1)的轉錄因子及其組合是Mash1，Ngn2或Sox2轉錄因子或其與其他因子的組合。

5.按權利要求1所述的直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，所述步驟2)的攜帶轉錄因子病毒載體是攜帶Mash1，Ngn2，Sox2，Nurr1，Pitx3，Lmx1A，Lmx1B或EN1編碼基因的慢病毒載體，或攜帶Mash1，Ngn2，Sox2，Nurr1或Pitx3編碼基因的腺病毒載體。

6.按權利要求1所述的直接從人成纖維細胞誘導產生多巴胺樣神經元的方法，其特征在于，所述步驟3)的病毒載體感染人成纖維細胞及多巴胺樣神經細胞的鑒定通過下述方法：

用構建的攜帶轉錄因子的病毒感染人離體成纖維細胞后，將感染過的人成纖維細胞接種到由失活的小鼠成纖維細胞組成的飼養(yǎng)層細胞上或細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)，存活的人成纖維細胞，經免疫熒光染色法鑒定所述細胞表達神經元標志物Tuj1以及與多巴胺產生有關的酶。

7.按權利要求6所述的方法，其特征在于，所述的與多巴胺產生有關的酶包括，酪氨酸羥化酶，多巴脫羧酶和多巴胺轉運體。