[發明專利]一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法

無效

• 申請號: 201110297248.5
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN102507937A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 楊琨;宋朝君;金伯泉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N30/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于腫瘤抗原的篩選技術領域，涉及一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法。

背景技術

惡性腫瘤是當前嚴重影響人類健康、威脅人類生命的主要疾病之一，因此，世界衛生組織和各國政府衛生部門都把攻克癌癥列為一項首要任務。在第18屆國際抗癌癥聯盟大會上，世界衛生組織發表的一項研究報告表明，全球癌癥狀況將日益嚴重，今后20年新患者人數將由目前的每年1000萬增加到1500萬，因癌癥而死亡的人數也將由每年600萬增至1000萬。為應對上述嚴峻形勢，報告呼吁各國制訂反癌癥的全國計劃和具體實施方案，并特別強調對癌癥預防、早期檢查和早期治療的重要意義。

盡管兩個世紀以前就有人提出用腫瘤疫苗來治療人類腫瘤的想法，但因長期以來無法在腫瘤細胞上找到腫瘤特異性抗原而進展緩慢。從20世紀80年代開始，各種不同腫瘤抗原的鑒定方法相繼建立，發現和鑒定了一系列腫瘤抗原，從而為腫瘤主動免疫治療和靶向治療的發展奠定了基礎。然而，腫瘤細胞的多種免疫逃逸機制，使得針對所發現的大部分腫瘤抗原作為靶點的免疫治療效果不盡如人意。

作為免疫治療理想的腫瘤抗原應具備：在腫瘤細胞特異、穩定表達，正常組織不表達，并且對維持腫瘤細胞的存活至關重要。近年來，隨著腫瘤免疫學的快速發展，只局限性表達于腫瘤及睪丸組織中的腫瘤/睪丸抗原的發現，無疑為腫瘤的免疫治療帶來了新的希望。由于腫瘤/睪丸抗原具有誘導機體產生特異性細胞免疫應答或特異性體液免疫應答的特點，使得腫瘤/睪丸抗原較其它類型的腫瘤抗原在腫瘤免疫治療中更具應用前景，已成為當今腫瘤研究的熱點之一。

雖然目前已有許多腫瘤/睪丸抗原被陸續鑒定出來，但可以實際應用于腫瘤疫苗構建及治療靶點的腫瘤/睪丸抗原仍十分有限。為了大規模快速發現更具應用價值的新腫瘤/睪丸抗原，由美國腫瘤研究院和路德維格癌癥研究所牽頭，聯合8個國家的30個研究機構，成立了“發現人類腫瘤抗原合作項目”的國際合作聯盟，足見篩選和鑒定新腫瘤/睪丸抗原的重要性和迫切性。

目前，以T細胞表位克隆技術(T?cell?epitope?cloning)、多肽洗脫法(peptide?elute?method)、表位預測法(epitope?prediction?method)、cDNA表達文庫血清學篩選分析技術(serological?analysis?of?cDNA?expression?libraries，SEREX)等為主的免疫學方法，和以差異顯示(different?display，DD)、代表性差異分析(representational?difference?analysis，RDA)、cDNA芯片分析(cDNA?microarray?analysis)、基因表達連續性分析(serial?analysis?of?gene?expression，SAGE)、表達序列標簽測序及大規模平行信號測序(massively?parallel?signature?sequencing，MPSS)等為主的基因表達分析法，在篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原方面發揮了巨大的作用。

然而，無論是免疫學方法還是基因表達分析法均有一定的局限性。前者依賴于腫瘤患者體內針對腫瘤/睪丸抗原的特異性免疫應答，但多數情況下，腫瘤患者處于免疫抑制狀態，所以利用這種方法篩選、鑒定并獲得腫瘤/睪丸抗原的機率可能是較低的。鑒于部分蛋白的核酸表達水平與蛋白表達水平有差異，即核酸雖有表達，但并不表示蛋白就一定會表達。因此，腫瘤/睪丸抗原基因表達分析法并不能有效地鑒定差異表達的蛋白，例如備受研究者關注的MPSS法也僅僅鑒定了CT45一個腫瘤/睪丸抗原。顯然，目前的腫瘤/睪丸抗原的鑒定方法無法滿足腫瘤免疫學的研究。

因此，建立新的、強有力的特異性腫瘤/睪丸抗原篩選工具，不僅將為人們更加全面、系統地發現新的腫瘤抗原，豐富人們對腫瘤分子機制的認識，同時也將促進腫瘤免疫診斷、治療的發展。

發明內容

本發明解決的問題在于提供一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，在人生精細胞作為免疫原篩選的特異性單克隆抗體的基礎上，來篩選和鑒定未知腫瘤/睪丸抗原的新方法。

本發明是通過以下技術方案來實現：

一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，包括以下步驟：

1)以人生精細胞作為免疫原，應用淋巴細胞雜交瘤技術制備單克隆抗體，免疫組化法篩選識別人生精細胞的特異性單克隆抗體；