[發明專利]一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法

無效

• 申請號: 201110297248.5
• 申請日: 2011-09-27
• 公開（公告）號: CN102507937A
• 公開（公告）日: 2012-06-20
• 發明（設計）人: 楊琨;宋朝君;金伯泉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第四軍醫大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N30/02
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

1.一種基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)以人生精細胞作為免疫原，應用淋巴細胞雜交瘤技術制備單克隆抗體，免疫組化法篩選識別人生精細胞的特異性單克隆抗體；

2)采用免疫組化染色方法，在蛋白水平上從識別人生精細胞的特異性單克隆抗體當中，篩選出只與人腫瘤組織反應，且與人正常組織不反應的特異性單克隆抗體作為候選識別腫瘤/睪丸抗原的抗體；

3)利用候選識別腫瘤/睪丸抗原的抗體與人陽性腫瘤細胞的裂解物進行抗原抗體反應，收集形成的免疫沉淀，再將候選識別腫瘤/睪丸抗原的抗體所捕獲的腫瘤/睪丸抗原進行蛋白組學分析和鑒定。

2.如權利要求1所述的基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，其特征在于，所述的在蛋白水平上的篩選為：采用免疫組化染色方法，篩選出只與人腫瘤組織石蠟切片反應，且與人正常組織石蠟切片不反應的特異性單克隆抗體作為候選識別腫瘤/睪丸抗原的抗體。

3.如權利要求1所述的基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，其特征在于，所述的免疫沉淀所獲得的腫瘤/睪丸抗原的收集為：候選識別腫瘤/睪丸抗原的抗體先與Sepharose?4B交聯，再與人陽性腫瘤細胞的裂解物進行抗原抗體反應，形成沉淀之后，沉淀中加入洗脫液，混合后離心，收集上清液，用超濾濃縮管濃縮或用冷丙酮沉淀，然后進行SDS-PAGE，收集所捕獲的腫瘤/睪丸抗原所對應的條帶；

所述的洗脫液為0.1mol/L的甘氨酸-鹽酸，pH2.7。

4.如權利要求1所述的基于生精細胞特異性單克隆抗體篩選和鑒定腫瘤/睪丸抗原的方法，其特征在于，所述的對免疫沉淀所獲得的腫瘤/睪丸抗原進行蛋白組學分析為：將所捕獲的腫瘤/睪丸抗原用蛋白酶降解成多肽，收集酶解后的多肽，對其進行質譜分析以確定蛋白序列。