[發明專利]一種大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法

有效

• 申請號: 201110296601.8
• 申請日: 2011-09-30
• 公開（公告）號: CN103033401A
• 公開（公告）日: 2013-04-10
• 發明（設計）人: 丁蘭平;黃冰心
• 申請（專利權）人: 汕頭大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 廣州三環專利代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭

1.一種大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法，包括如下步驟：

（1）配制苯胺藍染色混合試劑：母液配比為：乳酸︰苯酚︰甘油︰水=1︰1︰1︰1，然后以母液為基礎配制0.5%(w/v)苯胺藍染色混合試劑；

（2）選取樣品：選擇目標樣品并進行清潔，去除藻體表面的雜質和雜藻，切成長約1—1.5cm的樣品段；

（3）染色及表皮細胞層解離：取多數樣品，加入步驟（1）制得的混合試劑，一般4—8根樣品加入混合試劑1滴，處理正常樣品的處理時間為10—12分鐘，幼嫩組織的處理時間為3—4分鐘，讓樣品表皮細胞層與內皮層細胞間充分解離并染色；

（4）染色表皮片層的分離：切開表皮層，移去內部組織，可制成面積可達1?cm²的染色表皮細胞片層；

（5）染色表皮片層制片：染色表皮片層移置預先準備的載玻片，加保濕防腐劑，封片。

2.根據權利要求１所述的大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法，其特征是：在步驟（1）中先將苯酚、乳酸、甘油和水的混合過程中進行加熱。

3.根據權利要求１所述的大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法，其特征是：在步驟（2）中，在超聲波清洗儀中處理樣品8-10分鐘，幼嫩組織處理3-4分鐘，用潔凈海水沖洗樣品，鏡檢清洗效果。

4.根據權利要求１所述的大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法，其特征是：在步驟（3）中，挑選藻體表面干凈、均勻的樣品，置于凹形玻片中，加入1-2滴苯胺藍溶液，翻動樣品，使之均勻著色；針對樣品表皮細胞與內皮層細胞質地和致密性差異，利用苯酚的腐蝕性特點，解離表皮與內皮層細胞間的粘質和胞間連結。

5.根據權利要求１所述的大型海藻離體染色表皮片層的快速制片方法，其特征是：在步驟（4）中，左手用尖鑷子輕壓樣品內部組織部分，右手用解剖針輕輕從左至右劃開表皮細胞層，用軟毛筆移去內部組織，可制成面積可達1?cm²的染色表皮細胞片層。

6.根據權利要求1至5的任一權利要求所述一種大型海藻離體染色表皮片層的快速制備方法，其制片速度快，經濟適用，表皮細胞不變形，染色穩定，具有殺菌防腐作用，能較長時間保存。