[發明專利]一種乳清蛋白降血壓肽的制備方法

無效

• 申請號: 201110294533.1
• 申請日: 2011-09-28
• 公開（公告）號: CN102329845A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 呂兵;陸劍平;王建峰;王桂春
• 申請（專利權）人: 常熟市金城食品添加劑有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/16
• 代理公司: 常熟市常新專利商標事務所 32113
• 代理人: 朱偉軍

技術領域

本發明屬于生物技術領域，尤其涉及多肽的制備及初步分離技術。

背景技術

降血壓肽，也稱為ACE抑制肽（Angiotensin-converting?Enzyme?Inhibitory?Peptides,?ACEIP）是一類能夠降低人體血壓的小分子肽，它是血管緊張素轉換酶（Angiotensin-converting?Enzyme,?ACE）的抑制劑，可通過抑制血管緊張素Ⅰ向血管緊張素Ⅱ轉換以及阻止ACE降解緩激肽而起到降低血壓的作用。盡管目前的多種化學合成肽類可以抑制ACE活性，但都有一定的副作用，且由于他們的作用時間不長，停藥后會使血壓反彈，而大量的實驗證明乳蛋白來源的ACE抑制肽具有較高的體內降壓作用，主要集中在小分子的肽類。1979年Oshima等最早報道食品蛋白源ACE抑制肽是由細菌膠原酶降解明膠獲得的六條活性肽，并證實抑制ACE活性的肽分子量主要集中在1500u以下。1982年Maruyamas第一次從牛乳酪蛋白的胰蛋白酶水解液中分離出具有ACE抑制作用的十二肽、七肽、六肽和五肽。目前酶法制備乳源蛋白降血壓肽的方法包括直接酶解法和利用微生物間接酶解法，直接酶解又可分為單酶水解和復合酶水解。Nakamura、Yamamoto?和Abubakar等采用微生物間接酶解法從酸牛乳、干酪乳清中得到了具ACE抑制作用的降血壓肽；Aubois、拉爾夫、羅永康、毛學英等通過蛋白酶水解乳清蛋白的得到了具ACE抑制作用的降壓肽。從目前已有的相關文獻報道發現，水解乳清蛋白制備降血壓肽主要使用堿性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶等，均為單酶或雙酶水解法，上述方法得到的降血壓肽的分子量主要集中在1500u左右。

本發明模擬人體胃腸道消化的方式，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶單酶和復合酶三酶兩步水解法制備乳清蛋白降血壓肽，較單酶或雙酶水解法得到的降血壓肽分子量更小、體內吸收更容易。

發明內容

本發明的目的是提供一種以乳清蛋白為原料生產降血壓肽的方法，通過模擬人體胃腸道消化的方式，采用三酶兩步水解法獲得具有高ACE抑制活性，且易于體內吸收的小分子降血壓肽。

?本發明是這樣實現的，一種乳清蛋白降血壓肽的制備方法，包括如下步驟：

?(1)?乳清蛋白為原料，加水配制成質量濃度為1%~3%的乳清蛋白懸濁液，85℃~90℃保持10min使乳清蛋白變性，冷卻至室溫后調節pH=1.5~2.0，水解溫度為35℃~40℃，每1g乳清蛋白加胃蛋白酶25000U~35000U，水解時間為1~3h；

?(2)?酶解結束后80℃~90℃保持10min滅酶，冷卻至室溫后4000r/min離心；

??(3)?取步驟(2)所得上清液，調節pH=7.5~8.0，水解溫度為45℃~50℃，每1g乳清蛋白加胰蛋白酶10000U~20000U和胰凝乳蛋白酶10000U~20000U，水解時間為4~6h；

??(4)?酶解結束后80℃~90℃保持10min滅酶，冷卻至室溫后4000r/min離心，上清液真空濃縮后冷凍干燥得乳清蛋白降血壓肽粗品；

(5)?取步驟(4)的乳清蛋白降血壓肽粗品，配制20mg/ml的多肽溶液100mL，加入30g的DA201-C大孔吸附樹脂，30℃條件下靜態吸附3~5h，依次用25%、50%、75%、100%乙醇洗脫1~3h，收集并濃縮75%的乙醇洗脫組分；

?(6)?取步驟(5)中的質量百分比濃度為75%的乙醇溶液洗脫組分，利用Sephadex?G-10凝膠層析進一步分離，超純水1mL/min的流速進行洗脫，收集第二個洗脫峰，真空濃縮后冷凍干燥得粉末狀乳清蛋白降血壓肽。

本發明所具有的優點：

(1)?本發明提出了一種制備乳清蛋白降血壓肽的新方法，通過模擬人體胃腸道消化的方式，采用三酶兩步水解法。此法安全、無毒副作用，工藝簡單易行，便于工業化生產。

(2)?本發明制備的降血壓肽分子量分布在1000u以下、主要集中在600u左右，易于體內吸收，且具高ACE抑制活性。

(3)?本發明制備的降血壓肽來源于牛乳蛋白，因此具有安全、無毒副作用，對正常血壓無作用等特點，可用于制備降血壓藥物和食品。

具體實施方式：

實施例1