[發(fā)明專利]雙標(biāo)記核酸恒溫擴(kuò)增方法及檢測試紙條

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110293316.0
• 申請日: 2011-09-28
• 公開（公告）號: CN102329790A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張改平;王德國;鄧瑞廣;郭軍慶;李學(xué)伍;邢廣旭;趙東
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/70;C12Q1/04
• 代理公司: 鄭州大通專利商標(biāo)代理有限公司 41111
• 代理人: 張愛軍

1.一種雙標(biāo)記核酸恒溫擴(kuò)增方法，其特征在于：根據(jù)檢測目標(biāo)設(shè)計LAMP?引物，進(jìn)行內(nèi)引物、外引物和環(huán)引物的合成；用生物素和熒光素分別標(biāo)記兩種內(nèi)引物，或分別標(biāo)記兩種環(huán)引物，或分別標(biāo)記一種內(nèi)引物和一種環(huán)引物，將標(biāo)記引物加入LAMP反應(yīng)體系中恒溫擴(kuò)增，得到雙標(biāo)記核酸恒溫擴(kuò)增產(chǎn)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擴(kuò)增方法，其特征在于：所述標(biāo)記是標(biāo)記內(nèi)引物各引物的5’端。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的擴(kuò)增方法，其特征在于：所述熒光素為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明或四甲基異硫氰酸羅丹明。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項所述的擴(kuò)增方法，其特征在于：所述恒溫擴(kuò)增是在59-65℃溫度下、恒溫擴(kuò)增5-20min。

5.一種含有雙標(biāo)記核酸恒溫擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測試紙條，含有支撐層、吸附層，支撐層為不吸水薄片條，吸附層粘貼于支撐層上，所述吸附層從測試端依次為測試端纖維層、纖維素膜層和手柄端吸水材料層，其特征在于：所述纖維素膜層含有權(quán)利要求1所述的雙標(biāo)記核酸恒溫擴(kuò)增產(chǎn)物，用生物素親和蛋白及熒光素抗體分別在纖維素膜層上印制檢測印跡和對照印跡，或用生物素親和蛋白及熒光素金標(biāo)抗體分別在纖維素膜層上印制檢測印跡和對照印跡，檢測印跡和對照印跡平行排列為“????????????????????????????????????????????????”。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測試紙條，其特征在于：所述不吸水薄片條為硬質(zhì)塑料片條或不吸水硬紙片條，所述纖維素膜層是用硝酸纖維素膜、純纖維素膜或羧化纖維素膜制成，所述手柄端吸水材料層是用吸水紙制成，所述測試端纖維層是用玻璃棉、尼龍膜、聚偏二氟乙烯膜或聚酯膜制成。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測試紙條，其特征在于：所述熒光素為異硫氰酸熒光素、四乙基羅丹明或四甲基異硫氰酸羅丹明。

8.根據(jù)權(quán)利要求5-7任一項所述的檢測試紙條，其特征在于：所述測試端吸附纖維層、吸水材料層上均覆蓋有保護(hù)膜，在測試端纖維層的保護(hù)膜上印制有樣品標(biāo)記線，該標(biāo)記線距離測試端0.5cm。

9.權(quán)利要求5所述的檢測試紙條在檢測各種致病性微生物或病原體的特異性基因中的應(yīng)用。