[發(fā)明專利]畢赤酵母表達(dá)重組人白介素11的生產(chǎn)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110293041.0
• 申請(qǐng)日: 2004-11-25
• 公開（公告）號(hào): CN102329388A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃巖山;馬國昌;楊志愉;李輝;孫漢棟;徐飛虎;周金寶
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州九源基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/54
• 分類號(hào): C07K14/54;C07K1/20;C07K1/16
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 徐關(guān)壽

1.一種畢赤酵母表達(dá)重組人白介素11的生產(chǎn)方法，其特征在于，畢赤酵母發(fā)酵后，發(fā)酵液上清依次進(jìn)行反相柱層析、疏水柱層析和凝膠柱層析純化得到白介素11；所述反相柱層析過程中，反相層析柱填料為反相介質(zhì)SOURCE?15RPC或SOURCE?30RPC；所述疏水柱層析過程中，疏水柱填料為Phenyl或SOURCE?ISO基團(tuán)的疏水介質(zhì)；所述凝膠柱層析過程中，凝膠柱填料為低吸附的介質(zhì)Sephacryl、Superdex或Sephadex。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述反相層析流動(dòng)相選自三氟醋酸-乙腈體系，以0.01-1.0％的三氟醋酸為流動(dòng)相A，以0.01-1.0％的三氟醋酸加40-100％的乙腈為流動(dòng)相B，將離心后的發(fā)酵液上清經(jīng)5微米微孔濾膜過濾后直接上樣后，用流動(dòng)相A平衡柱子；當(dāng)所有未結(jié)合在柱上的組分流出后，用30％的流動(dòng)相B沖洗2-3個(gè)柱體積，將大部分蛋白聚體、內(nèi)毒素等雜質(zhì)洗脫；最后用30-50％的流動(dòng)相B梯度洗脫目標(biāo)峰。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述疏水柱層析的流動(dòng)相選自20-50mM?Tris-HCl、Gly-NaOH或磷酸緩沖液，pH的范圍在6.0-10.0，加入0.5-1.6mol/L(NH₄)₂SO₄或0.5-1.6mol/L?Na₂SO₄的緩沖液為流動(dòng)相A，以不含(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄的緩沖液為流動(dòng)相B；反相目標(biāo)峰用pH的范圍在6.0-10.0、20-50mM?Tris-HCl、Gly-NaOH或磷酸緩沖液稀釋10-20倍，降低反相目標(biāo)峰中的乙腈濃度；在上述稀釋液中直接加入高濃度的(NH₄)₂SO₄或Na₂SO₄溶液至濃度為0.8-1.6mol/L(NH₄)₂SO₄或0.8-1.6mol/L?Na₂SO₄，上樣于疏水柱，然后以流動(dòng)相A平衡柱子，再以0-100％流動(dòng)相B梯度洗脫，收集目標(biāo)峰。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述凝膠柱層析的流動(dòng)相為5-10mM的磷酸緩沖液。