[發(fā)明專利]一種制備D-酪氨酸的化學(xué)-酶法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110292491.8
• 申請(qǐng)日: 2011-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102352392A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏仕文;方國(guó)蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶郵電大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P13/22
• 分類號(hào): C12P13/22
• 代理公司: 重慶市恒信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50102
• 代理人: 劉小紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種制備D-酪氨酸的化學(xué)酶法，屬于生物催化制備手性藥物中間體技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

D-酪氨酸是一種非蛋白源手性氨基酸，在手性藥物合成中具有廣泛用途。例如，以D-酪氨酸為手性中間體合成的多肽藥物阿托西班是一種保胎藥，合成的脫乙酰茴香霉素具有抗原蟲(chóng)、抗變形蟲(chóng)、抗真菌、抗腫痛、防止植物真菌病的作用，合成的多肽藥物用于惡性腫瘤的治療具有特殊療效，還可用于對(duì)肺部、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、關(guān)節(jié)、心內(nèi)膜、眼、耳、皮膚、腸胃、泌尿系統(tǒng)炎癥具有極好療效的消炎藥等。

?

D-酪氨酸的制備方法主要有化學(xué)拆分法、生物拆分法、不對(duì)稱轉(zhuǎn)換法等。

1）化學(xué)拆分法。文獻(xiàn)（J.Bio.Chem.,1946,166(1),1.）報(bào)道了一種采用番木鱉堿拆分DL-N-乙酰酪氨酸制備D-酪氨酸的方法，收率31濾后濾餅用少量去離子水洗滌，烘干得到D-酪氨酸22.5g33%。何佺等（CN1569818）公開(kāi)了一種采用L-酒石酸拆分DL-酪氨酸乙酯制備D-酪氨酸的方法，收率25%。化學(xué)拆分的主要缺點(diǎn)是存在L-酪氨酸的夾帶現(xiàn)象，不僅拆分收率低，而且D-酪氨酸的光學(xué)純度差，拆分工藝復(fù)雜。

2）生物拆分法。專利（EP119275）公開(kāi)了一種利用海因酶/氨甲酰水解酶制備D-酪氨酸的方法。海因酶選擇性催化水解DL-5-羥芐海因?yàn)镈-N-甲酰酪氨酸，同時(shí)實(shí)現(xiàn)L-5-羥芐海因消旋化。氨甲酰水解酶催化D-N-甲酰酪氨酸水解為D-酪氨酸。呂志賢等（CN101153300）公開(kāi)了了一種利用L-氨基酰化酶催化DL-¹⁵N-乙酰酪氨酸水解制備用于藥物代謝研究的示蹤劑-D-¹⁵N-酪氨酸的方法。馬云峰等（CN1900298）公開(kāi)了一種利用固定化D-氨基酰化酶催化DL-N-乙酰酪氨酸制備D-酪氨酸的方法。海因酶法需要化學(xué)合成DL-5-羥芐海因，成本較高。氨基酰化酶法采用游離形式的酶，不能循環(huán)使用，尤其是D-氨基酰化酶，價(jià)格非常高，不適合D-酪氨酸的規(guī)模化生產(chǎn)。

3）不對(duì)稱轉(zhuǎn)化法。馬云峰等（CN1876631）公開(kāi)了一種制備D-酪氨酸的不對(duì)稱轉(zhuǎn)換法。在水楊醛存在下，DL-酪氨酸、L-酒石酸在丙酸中形成D-酪氨酸·L-酒石酸鹽，然后解鹽得到D-酪氨酸，總收率大于60%。不對(duì)稱轉(zhuǎn)換法制備D-酪氨酸的缺點(diǎn)是D-酪氨酸·L-酒石酸鹽中容易夾帶少量的L-酪氨酸·L-酒石酸鹽，致使產(chǎn)品的光學(xué)純度不高，此外，共存的L-酒石酸很難完全去除。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種新的制備D-酪氨酸的化學(xué)酶法。利用高對(duì)映選擇性的固定化青霉素酰化酶拆分DL-N-苯乙酰酪氨酸，得到L-酪氨酸、苯乙酸和D-N-苯乙酰酪氨酸，D-N-苯乙酰酪氨酸酸解為苯乙酸和D-酪氨酸。技術(shù)路線如下：

本發(fā)明包括下列步驟：

1）DL-N-苯乙酰酪氨酸制備：在50～80℃和pH2～3條件下，以醋酸為反應(yīng)介質(zhì)，摩爾比為1：1～3的DL-酪氨酸與酰化劑攪拌反應(yīng)10～20h；反應(yīng)完成后用鹽酸調(diào)pH1～2，析出DL-N-苯乙酰酪氨酸固體；

2）DL-N-苯乙酰酪氨酸酶催化水解：在20～40℃和pH8～10條件下，0.1～0.5mol/L?DL-N-苯乙酰酪氨酸在固定化青霉素酰化酶催化下水解10～20h；固定化青霉素酰化酶與DL-N-苯乙酰酪氨酸的質(zhì)量比為1：3～10，反應(yīng)完成后，濃鹽酸調(diào)pH1～2，析出苯乙酸和D-N-苯乙酰酪氨酸；

3）D-酪氨酸制備：D-N-苯乙酰酪氨酸在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，3～8mol/L鹽酸水溶液中，溫度90～115℃下酸解3～15h，酸解液濃縮至鹽酸水溶液體積的1/5～1/10，用與濃縮液等體積的乙酸乙酯萃取苯乙酸三次，水相調(diào)pH5.6，冷凍析出D-酪氨酸。

本發(fā)明的有益效果

????與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提出的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1）以酸性條件替代堿性條件制備DL-N-苯乙酰酪氨酸，避免了酪氨酸羥基苯乙酸酯的形成，簡(jiǎn)化了后續(xù)的酶催化反應(yīng)；2）固定化青霉素酰化酶高度的對(duì)映選擇性，保證D-酪氨酸的高光學(xué)活性；?3）無(wú)效對(duì)映體L-酪氨酸的循環(huán)拆分和固定化青霉素酰化酶的循環(huán)使用，大大降低了過(guò)程成本。

具體實(shí)施方式

?以下是以固定化青霉素酰化酶為生物催化劑，通過(guò)對(duì)映選擇性水解制備D-酪氨酸的實(shí)施例，但本發(fā)明并不限于所列出的幾個(gè)實(shí)例。

實(shí)施例1：?DL-N-苯乙酰酪氨酸制備