[發(fā)明專利]檢測馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫試紙條及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110292092.1
• 申請日: 2011-09-29
• 公開（公告）號(hào): CN102445536A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王靜;孫時(shí);楊宇;宋峰林;楊永莉;王旺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N33/569
• 分類號(hào): G01N33/569;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物檢測領(lǐng)域，具體涉及一種可同時(shí)檢測東方馬腦炎病毒抗體、西方馬腦炎病毒抗體、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒抗體及其可分別定量檢測的金標(biāo)免疫試紙條及其制備方法和應(yīng)用。?

背景技術(shù)

東方馬腦炎病毒（Eastern?Equine?Encephalitis?Virus,?EEEV）屬?A組蟲媒病毒披膜病毒科甲病毒屬，含單股正鏈?RNA，該病毒主要是通過蚊媒傳播，而且可以經(jīng)含有病毒的氣溶膠通過呼吸道感染人類，其引起的腦膜腦炎，是一種急性、病毒性、人畜共患自然疫源性的傳染性疾病。感染后發(fā)病率高，傳染性強(qiáng)，致死率高，缺乏有效的預(yù)防方法，病愈后多留有后遺癥，對人群危害性大，所以被國際社會(huì)列為防制生物恐怖的主要病種之一,備受世界各國關(guān)注。?

我國對東方馬腦炎病毒生物戰(zhàn)劑的偵檢和醫(yī)學(xué)防護(hù)等研究尚處于空白，更缺乏中、長期研究發(fā)展規(guī)劃，針對東方馬腦炎病毒的恐怖襲擊尚無配套診斷試劑和有效免疫治療和防護(hù)手段，所以發(fā)明快速、簡便、能適合現(xiàn)場檢測的檢測東部馬腦炎病毒的方法刻不容緩，對我國在國際社會(huì)上的形象和檢測地位具有非常重要的意義。

西方馬腦炎（Western?Equine?Encephalitis，簡寫為WEE）（以下簡稱為西馬）是由西馬病毒引起的能使人類和馬等多種動(dòng)物致死性的一種急性病毒性腦炎。西馬病毒可經(jīng)呼吸道傳播感染，但主要是由蚊蟲傳播，西馬病毒的抗原性是由囊膜糖蛋白E1和馬腦炎病毒決定的。E1含有一個(gè)中和抗原位點(diǎn)，感染西馬病毒后會(huì)產(chǎn)生相應(yīng)抗體，所以檢測西馬病毒E1C抗體即可得知是否有感染該病毒。1990年何海懷等從新疆烏蘇縣采集的按蚊和博樂縣的全溝硬蜱中分離出西馬病毒。呂新軍等在對我國人體血清調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，西馬病毒抗體陽性率為2.71%。這些情況都證實(shí)了西馬病毒在我國的存在，說明了西馬病毒有可能成為我國感染性疾病的新病原之一。?

委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒（Venezuelan?equine?encephalitis?virus，簡寫為VEEV）（以下簡稱為委馬病毒）是屬于披膜病毒科、甲病毒屬，基因組為單股正鏈RNA的可引起委內(nèi)瑞拉馬腦炎的烈性病毒。該病毒主要由蚊蟲吸血傳播，可引起馬匹、人類或其他動(dòng)物患病，研究表明，氣溶膠也是一種較重要的傳播途徑。該病毒有較高的發(fā)病率和致死率，病愈后還會(huì)留有后遺癥，已被美國疾病預(yù)防控制中心列為生物恐怖劑。雖然我國境內(nèi)還未有發(fā)現(xiàn)委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒的報(bào)道，但是隨著國際旅游和貿(mào)易交往日益頻繁，攜帶此病毒傳入我國的風(fēng)險(xiǎn)系數(shù)以及潛在的生物恐怖襲擊的危險(xiǎn)日益增加，所以我國國內(nèi)尤其是出入境口岸應(yīng)提高警惕，加強(qiáng)對委馬病毒的檢測，防止該病毒在我國的暴發(fā)和流行。?

金標(biāo)免疫層析法（GICA）是20世紀(jì)90年代以來在單克隆抗體技術(shù)、金標(biāo)技術(shù)和新材料技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)新型體外診斷技術(shù)。近年來發(fā)展迅速，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域特別是醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中得到了廣泛應(yīng)用。該技術(shù)主要是將特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在NC?膜上，金標(biāo)標(biāo)記試劑吸附在結(jié)合墊上，當(dāng)待測樣品加到試紙條一端的樣品墊上后，通過虹吸原理向前移動(dòng)，溶解結(jié)合墊上的金標(biāo)標(biāo)記試劑后相互反應(yīng)，再移動(dòng)至固定的抗原或抗體的區(qū)域時(shí)，待測物和金標(biāo)試劑的復(fù)合物又與之發(fā)生特異性結(jié)合而被截留，聚集在檢測帶上，通過目測的金標(biāo)標(biāo)記物得到直觀的顯色結(jié)果。而流離標(biāo)記物則越過檢測帶，達(dá)到與結(jié)合標(biāo)記物自動(dòng)分離的目的。由于快速簡便、準(zhǔn)確，具有高度特異性和高敏感性，結(jié)果直觀可靠，而且試劑和樣品用量極少，每個(gè)樣品只需1-2μl,無需儀器設(shè)備，簡化了煩瑣的常規(guī)操作過程，同時(shí)也減小了因操作引起的誤差，金標(biāo)免疫層析技術(shù)是一種目前發(fā)展最快的復(fù)合型免疫層析技術(shù)。金標(biāo)本身為紅色，不需要加入顯色試劑，對人體無毒害。目前該技術(shù)已經(jīng)在臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)廣泛應(yīng)用，被認(rèn)為是微生物和傳染病及寄生蟲病診斷中最有前途的新技術(shù)之一。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種使用方便、檢測快捷、定性、特異性和敏感性高、可同時(shí)檢測東方馬腦炎病毒抗體、西方馬腦炎病毒抗體、委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒抗體的免疫層析試紙條及可其分別定量檢測的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，本發(fā)明的另一目的是提供一種上述試紙條的制備方法和應(yīng)用。?