[發(fā)明專利]檢測馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫試紙條及其制備方法和應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110292092.1
• 申請日: 2011-09-29
• 公開（公告）號: CN102445536A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王靜;孫時;楊宇;宋峰林;楊永莉;王旺
• 申請（專利權(quán)）人: 中國檢驗檢疫科學(xué)研究院
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/531
• 代理公司: 北京中創(chuàng)陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11003
• 代理人: 尹振啟

1.一種檢測馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，其特征在于，該金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)包括用于定量檢測的金標(biāo)免疫分析儀、用于檢測東方馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫試紙條A、用于檢測西方馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫試紙條B、用于檢測委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒抗體的金標(biāo)免疫試紙條C，三個試紙條均包括反應(yīng)支撐物、緊密連接于反應(yīng)支撐物上表面中部的硝酸纖維膜，硝酸纖維膜起始端的上表面與吸水墊部分重疊連接、硝酸纖維膜末端的上表面與金標(biāo)抗體保護膜部分重疊連接，金標(biāo)抗體保護膜的上表面部分重疊連接有樣品墊；

其中，金標(biāo)免疫試紙條A中的金標(biāo)抗體保護膜包括膜本體、及均勻涂布在其上的金標(biāo)標(biāo)記的金黃色葡萄球菌A蛋白或重組東方馬腦炎病毒?E1C抗原涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置有羊抗兔IgG或兔抗東方馬腦炎病毒IgG包被的質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有東方馬腦炎抗原包被的檢測條帶；

金標(biāo)免疫試紙條B中的金標(biāo)抗體保護膜包括膜本體、及均勻涂布在其上的金標(biāo)標(biāo)記的金黃色葡萄球菌A蛋白或重組西方馬腦炎病毒?E1C抗原涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置有羊抗兔IgG或兔抗西方馬腦炎病毒IgG包被的質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有西方馬腦炎病毒抗原包被的檢測條帶；

金標(biāo)免疫試紙條C中的金標(biāo)抗體保護膜包括膜本體、及均勻涂布在其上的金標(biāo)標(biāo)記的金黃色葡萄球菌A蛋白或重組委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒E抗原涂層，硝酸纖維膜上靠近其起始端處設(shè)置有羊抗兔IgG或兔抗委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒IgG包被的質(zhì)控條帶、靠近其末端處設(shè)置有委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒抗原包被的檢測條帶。

2.如權(quán)利要求1所述的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，其特征在于，所述金標(biāo)免疫試紙條A、金標(biāo)免疫試紙條B和金標(biāo)免疫試紙條C并排一體制成。

3.如權(quán)利要求2所述的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，其特征在于，所述反應(yīng)支持物為PVC板，吸水墊為濾油紙；所述金標(biāo)抗體保護膜為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。

4.如權(quán)利要求2所述的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，其特征在于，所述樣品墊為玻璃纖維膜、聚脂膜或濾紙纖維。

5.如權(quán)利要求2所述的金標(biāo)免疫層析系統(tǒng)，其特征在于，所述金標(biāo)免疫試紙條A、金標(biāo)免疫試紙條B和金標(biāo)免疫試紙條C整體的外部各自包裹設(shè)置有外殼，該外殼上對應(yīng)于所述樣品墊處設(shè)置有樣品孔，外殼上對應(yīng)于所述質(zhì)控條帶、檢測條帶處設(shè)置有觀察窗。

6.一種如權(quán)利要求1所述金標(biāo)免疫試紙條的制備方法，其特征在于，該制備方法具體為：

1）?制備膠體金；

2）?利用制得的膠體金分別標(biāo)記相應(yīng)的金黃色葡萄球菌A蛋白或重組東方馬腦炎病毒?E1C抗原、金黃色葡萄球菌A蛋白或重組西方馬腦炎病毒?E1C抗原、金黃色葡萄球菌A蛋白或重組委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒E抗原；

3）?用隔流噴金劃線機以設(shè)定噴膜速度分別將羊抗兔IgG或兔抗東方馬腦炎病毒IgG噴涂到硝酸纖維膜一的起始端以形成質(zhì)控條帶一、將羊抗兔IgG或兔抗西方馬腦炎病毒IgG噴涂到硝酸纖維膜二的起始端以形成質(zhì)控條帶二、將羊抗兔IgG或兔抗委內(nèi)瑞拉馬腦炎病毒IgG噴涂到硝酸纖維膜三的起始端以形成質(zhì)控條帶三，將重組馬腦炎蛋白噴涂到三個硝酸纖維膜的末端以形成相應(yīng)的檢測條帶；

4）?將步驟2）中制得的膠體金標(biāo)記的三種蛋白或抗原分別均勻涂布在三個玻璃纖維膜上，并烘干或冷凍干燥，制成三個相應(yīng)的金標(biāo)抗體保護膜；

5）?在反應(yīng)支撐物上表面中部設(shè)置步驟3）中的三個硝酸纖維膜，三個硝酸纖維膜起始端的上表面分別與相應(yīng)的吸水墊部分重疊連接，三個硝酸纖維膜末端的上表面與相應(yīng)的金標(biāo)抗體保護膜部分重疊連接，金標(biāo)抗體保護膜的上表面部分重疊連接相應(yīng)的樣品墊；

6）?將步驟5）中形成的包含三個試紙條的試紙切成規(guī)格大小的形狀，進行干燥、裝殼，以形成試紙條。

7.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟1）中制備膠體金的具體步驟為：

1）?制備HAuCl₄水溶液：磁力攪拌下加入HAuCl₄，同時加入檸檬酸三鈉水溶液，顏色穩(wěn)定后繼續(xù)加熱，冷卻至室溫后加純水補足至設(shè)定值，4?℃避光保存；

2）?用K₂CO₃調(diào)pH值為6.0-6.4；

3）?將膠體金調(diào)至pH?6.0-6.4，用PB?稀釋?SPA?至0.2?mg/ml；

4）?保持膠體金穩(wěn)定。