[發明專利]放線菌素D新同系物2-甲基-放線菌素D及其制備方法

有效

• 申請號: 201110289534.7
• 申請日: 2011-09-19
• 公開（公告）號: CN102617707A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 蔣繼宏;袁博;陳永強;馮友建;陳鳳美;鞠秀云;王力;曹小迎;秦盛;劉金娟;卞光凱
• 申請（專利權）人: 江蘇師范大學
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C12P21/04;A61K38/08;A61P35/00;C12R1/465
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物學、藥物化學、有機化學領域，具體的說是設計一株鏈霉菌中提取分離得到的抗腫瘤細胞化合物2-甲基-放線菌素D以及該化合物的制備方法和應用，該化合物為放線菌素D的同系物。?

背景技術

平蓋靈芝含有豐富的麥角甾醇、靈芝酸、靈芝多糖、氨基酸、多肽、腺苷、三萜類及多種微量元素，其中有機鍺含量高達12380ppm，有機硒含量也很高。雖然，平蓋靈芝化學成分目前已經研究得較為深入，但對平蓋靈芝內生放線菌研究甚少。放線菌在自然界分布廣泛，主要以孢子或菌絲狀態存在于土壤、空氣和水中，放線菌與人類的生產和生活關系極為密切，目前廣泛應用的抗生素約70％是各種放線菌所產生。放線菌起初從土壤中分離獲得，隨著研究的深入，人們開始從植物中分離放線菌，通過研究發現放線菌廣泛分布在各種已研究過的植物體中，并且能產生一些重要的化合物，有些具有新的化學結構。而從真菌中分離放線菌的報道較少，從平蓋靈芝內生放線菌中分離化合物更是鮮有報道。?

發明內容

為了從真菌中分離放線菌，本發明提供了一種放線菌素D新同系物2-甲基-放線菌素D及其制備方法。?

本發明的具體技術方案如下：該放線菌素D新同系物2-甲基-放線菌素D，其特征在于該化合物的化學結構式如下：?

本發明還提供了鏈霉菌累西菲鏈霉菌Streptomyces?recifensis?CGMCC?No.5228發酵及萃取分離方法，其培養、提取分離步驟如下：?

1.菌株發酵?

種子培養基：?

酵母浸膏4.0^±1g，麥芽浸膏5.0^±1g，葡萄糖4.0^±1g，MgSO₄0.1^±0.05g，蒸餾水0.8～1.5L，pH-7.2；?

發酵培養基：?

溶性淀粉5.0^±1g，葡萄糖10.0^±2g，蛋白胨5.0^±1g，酵母浸膏5.0^±1g，NaCl4.0?^±2g，K₂HPO₄0.5^±0.01g，MgSO₄0.5^±0.1g，CaCO₃2.0^±0.5g，蒸餾水08～1.5L，pH＝7.2；?

具體流程：?

發酵菌株為累西菲鏈霉菌Streptomyces?recifensis?CGMCC?No.5228，該菌在培養基成分為的種子培養基中振蕩培養60～80h。然后接種于發酵罐中，發酵罐發酵10.0L，轉速1000rpm在28^±2℃下培養100^±5h。?

發酵菌株累西菲鏈霉菌Streptomyces?recifensis保存于中國普通微生物菌種保藏管理中心(地址：北京市朝陽區北辰西路1號院，中國科學院微生物研究所菌種保藏中心)，保藏編號CGMCC?NO.5228。?

2.有效成分的萃取、分離?

(1)萃取：將發酵離心，菌絲體與發酵液分離，發酵液用旋轉蒸發儀濃縮10-20倍，醇沉，然后回收乙醇，清夜用氯仿或乙酸乙酯萃取2-3次，合并萃取液后濃縮。?

(2)分離：將上述得到的浸膏應用硅膠柱層析，以氯仿∶甲醇?梯度洗脫，?薄層色譜檢測，收集含有2-甲基-放線菌素D的流份，合并濃縮后再經凝膠LH-20層析，以氯仿∶甲醇＝5∶4洗脫，薄層色譜檢測，得到2-甲基-放線菌素D純品。?

上述步驟(2)中乙醇用95％濃度，硅膠柱層析中，先以氯仿∶甲醇＝100～30∶0∶70梯度洗脫，然后以氯仿∶甲醇＝10～0∶90～100梯度洗脫。?

上述提取分離得到放線菌素D新同系物2-甲基-放線菌素D在制備治療抗腫瘤藥物用的醫用。?

3.化合物的結構表征?