[發明專利]一種判別螺旋藻品系能否應用于大規模養殖生產的方法

無效

• 申請號: 201110289019.9
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號: CN102329868A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 汪志平;董丹丹;邵斌;藍瑾瑾;王景梅;劉新穎;于金鑫;呂蓓芬;陳子元
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/89
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司 33212
• 代理人: 金祺

1.一種判別螺旋藻品系能否應用于大規模養殖生產的方法，其特征在于，是對被鑒定螺旋藻品系的ftsZ基因進行測序，并與已知鈍頂螺旋藻品系Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37一起進行基于ftsZ基因序列的差異位點數分析及系統發生樹構建；如果被鑒別螺旋藻品系與Sp-4、Sp-12和Sp-17的ftsZ基因序列聚成一類，表示被鑒定螺旋藻品系生產性狀優良能夠應用于大規模養殖生產；如果被鑒別螺旋藻品系與Sp-18、Sp-37的ftsZ基因序列聚成一類，則表示被鑒定螺旋藻品系適應能力差不能應用于大規模養殖生產。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，該方法具體包括以下步驟：

(1)PCR引物設計與擴增

利用Primer?5.0引物設計軟件進行PCR擴增引物的設計，得到上游引物PF：5’-ATGAACAGTCCTGGAGTAGTGA-3’、下游引物PR：5’-GGAATAGAAGTTATGGGTCGA-3’；

擴增的反應條件為：25μL?PCR反應體系中含引物PF和PR各0.5μmol/L，4種dNTP：dATP、dGTP、dCTP和dTTP各1μmol/L，2.5U的Taq?DNA聚合酶，10倍的PCR緩沖液2.5μL，50ng基因組DNA，反應程序：94℃?5min；94℃?30s，42℃?45s，72℃?1min，31個循環；72℃?8min；

(2)PCR產物的克隆及測序

將經DNA凝膠回收試劑盒回收純化的PCR產物連接到pMD18-T載體上，轉化感受態E.coli?TG1，藍白斑法篩選陽性克隆，提取質粒并作酶切鑒定，將含有目的片段的重組質粒進行測序，分別測得Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37和待鑒定螺旋藻品系基因組DNA的ftsZ基因序列；

(3)序列比對與系統發生樹構建

對上述Sp-4、Sp-12、Sp-17、Sp-18、Sp-37和待鑒定螺旋藻品系的多重序列比對采用Clustal?X?1.81軟件，其系統發生樹的構建采用Phylip?3.65軟件包；以ftsZ基因序列作為一種分子標記與已知螺旋藻品系進行比對，由此鑒別螺旋藻生產性狀的優劣。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，在擴增反應中選用的試劑和儀器為：Taq?DNA聚合酶和瓊脂糖為上海生工生物工程公司產品；克隆載體pMD18-T，以及dNTP、DNA限制性內切酶、T4?DNA連接酶均為日本TaKaRa公司產品；DNA凝膠回收試劑盒購于上海英駿公司；PCR引物由上海英駿公司合成，其它試劑均為分析純，序列擴增用美國Hybaid公司的Thermal?Cycler?PCR儀，測序用美國ABI公司的3730型測序儀。