[發明專利]一種用于富集金黃色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201110288372.5
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號: CN102426229A
• 公開（公告）日: 2012-04-25
• 發明（設計）人: 孫力軍;王雅玲;劉陽;徐德峰;聶芳紅;劉喚明
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/569;G01N1/40
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 劉廣生

1.一種用于富集金黃色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的制備方法，其特征在于：該方法以磁珠為載體，偶聯人IgG，制備成能夠富集金黃色葡萄球菌的免疫磁珠；

具體方法是：

（1）活化：取磁珠放入離心管中，加入活化緩沖液洗滌磁珠，反復三次，每次間隔3~5分鐘，除去活化緩沖液后加入活化劑碳二亞胺（EDC）和N-羥基琥珀酰亞胺（NHS）各200μL，混勻，將磁珠于22~25℃條件下震蕩孵育30～60分鐘，將磁珠活化；

（2）偶聯：用偶聯緩沖液洗滌磁珠，反復三次，每次間隔3~5分鐘，加入人IgG，混勻，于22~25℃條件下震蕩孵育24小時，制成人IgG免疫磁珠；

（3）封阻：人IgG免疫磁珠經洗滌緩沖液洗滌，反復三次，每次間隔3~5分鐘，加入封阻緩沖液于22~25℃條件下作用1～2小時，存放于保存緩沖液中，4℃保存待用；

上述各步驟中所述：

活化緩沖液：0.1M?MES和0.05%吐溫-20，pH6.0-6.5；

偶聯緩沖液：0.1M?MES和0.05%吐溫-20，pH7.0-7.4；

洗滌緩沖液：0.1M?MES，0.1%BSA，0.05%吐溫-20；

封阻緩沖液：0.2M?pH8.5?Tris溶液，0.1%BSA，0.05%吐溫-20

保存緩沖液：0.1M?MES，pH7.4；

活化劑：EDC和NHS，濃度均為1-5mg/mL，用活化緩沖液溶解，先加入EDC，混勻后加入NHS，震蕩均勻。

2.一種用于富集金黃色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的應用，其特征在于：通過將免疫磁珠添加到待檢樣品中，在一定條件下達到分離或富集并檢測金黃色葡萄球菌的目的，并以人IgG免疫磁珠分離效果為依據進行產品標注和宣傳，具體應用為：

1）按照金黃色葡萄球菌檢驗國標方法中的樣品前處理辦法處理樣品，免疫磁珠與樣品在偶聯緩沖液中于37℃充分震蕩孵育1小時，對樣品中金黃色葡萄球菌進行富集；

2）在37℃條件下，將富集的金黃色葡萄球菌在7.5%NaCl營養瓊脂培養基中培養18~24小時后計數。

3.根據權利要求2所述的一種用于富集金黃色葡萄球菌的人IgG免疫磁珠的應用，其特征在于：利用制備的人IgG免疫磁珠對食品、飼料、化妝品、公共場所工具和臨床樣本中的金黃色葡萄球菌進行富集和檢驗。