[發(fā)明專利]一種防治黃瓜霜霉病的生防復(fù)合菌劑CB28合劑

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110288017.8
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號(hào): CN102428964A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 郭堅(jiān)華;劉紅霞;王云鵬;鄭麗
• 申請（專利權(quán)）人: 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01N63/02
• 分類號(hào): A01N63/02;A01P3/00;C12N1/20;C12R1/11;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于植物保護(hù)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種防治黃瓜霜霉病的生防復(fù)合菌劑CB28合劑。

技術(shù)背景

黃瓜是全球十大蔬菜栽培作物之一，在我國“菜籃子”工程中占有重要地位。其葉部病害很多，其中以霜霉病危害最重。因此，研究和防治日光大棚黃瓜病害刻不容緩。在黃瓜葉部病害中，霜霉病是極易發(fā)生的，一旦發(fā)生，面積大、流行性強(qiáng)，危害嚴(yán)重，防治上難度較大，是黃瓜日光大棚生產(chǎn)中最主要的一大病害。

黃瓜霜霉病是古巴假霜霉菌(Psedoperonspora?cubensis(Berkis?Curt)Rostov)引起的一種真菌病害，在各地普遍發(fā)生。病菌的孢子囊可隨風(fēng)雨、黃瓜甲蟲、農(nóng)器具等進(jìn)行傳播，是一種主要的氣傳病害；且為專性寄生菌，對(duì)寄主植物的?；x擇性很強(qiáng)。

隨著我國日光大棚面積急劇增加，反季節(jié)黃瓜大棚栽培種植大量突現(xiàn)，合適的溫濕度等條件，給霜霉病病菌的越冬、傳播帶來有利條件，一年四季侵染黃瓜，發(fā)病嚴(yán)重時(shí)，全葉呈黃褐色干枯，最后導(dǎo)致植株干枯早死，縮短收瓜期，嚴(yán)重影響黃瓜產(chǎn)量，損失可達(dá)20％到60％，是影響產(chǎn)量的主要制約因素之一。

目前，對(duì)日光大棚黃瓜種植而言，控制此病害主要依靠化學(xué)藥劑，但是其發(fā)生期的預(yù)測預(yù)報(bào)精確度不高，很難在防治時(shí)間點(diǎn)上適期用藥，通常做法是不管發(fā)病與否，用藥次數(shù)急劇增加至每周一次，用藥量也急劇增加，藥劑種類選擇也無法游刃有余，大多是一些保護(hù)類化學(xué)藥劑如霜脲·錳鋅wp、唖酮·霜脲氰水分散粒劑、代森錳鋅·霜脲氰wp、氟菌·霜霉威懸浮劑等。另外化學(xué)藥劑的成倍使用，使得農(nóng)田生態(tài)系統(tǒng)易遭到嚴(yán)重破壞，收獲后的黃瓜農(nóng)藥殘留嚴(yán)重，給人們健康帶來不可忽視的嚴(yán)重威脅。同時(shí)，化學(xué)農(nóng)藥不易降解，高殘留，對(duì)人、畜的安全性都嚴(yán)重限制了在將來的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的使用。因此，非化學(xué)性防治措施目前已成為防治黃瓜病害的核心方式，而生物防治則為其中最有前途的方法。

由此可見，開發(fā)新的、更為高效和安全的微生物殺菌劑控制黃瓜霜霉病是提高社會(huì)生產(chǎn)總量的需要，同時(shí)更是農(nóng)業(yè)安全及可持續(xù)發(fā)展的需要，符合社會(huì)發(fā)展需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對(duì)利用生物防治解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中黃瓜霜霉病防治難度大，成本高，而化學(xué)農(nóng)藥抗性日益突出，農(nóng)藥殘留高等問題提供一種防治黃瓜霜霉病的生防復(fù)合菌劑CB28合劑，該CB28合劑對(duì)黃瓜霜霉病防效為62.00％以上。

本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種防治黃瓜霜霉病的生防復(fù)合菌劑CB28合劑，含兩種有效細(xì)菌成分：分別是巨大芽孢桿菌(Bacillus?meqaterium)BS13，于2011年04月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC?NO.4734；腸桿菌(Enterobacter?sp.)BJN15，于2011年04月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCC?NO.4733；該合劑中所述的保藏號(hào)為CGMCC?NO.4734的巨大芽孢桿菌BS13與保藏號(hào)為CGMCC?NO.4733的腸桿菌BJN15的活菌數(shù)量比為1∶1，總活菌總濃度為1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

所述的防治黃瓜霜霉病的生防復(fù)合菌劑CB28合劑的制備方法，包含如下步驟：

(1)種子菌液的培養(yǎng)：分別將保藏號(hào)為CGMCC?NO.4734的巨大芽孢桿菌BS13和保藏號(hào)為CGMCC?NO.4733的腸桿菌BJN15接種到LB培養(yǎng)液中，在30～32℃、180～220rpm條件下培養(yǎng)至600nm處的OD值為0.5～0.8之間時(shí)結(jié)束培養(yǎng)，獲得種子菌液；

(2)濕菌制備：取步驟(1)中的種子菌液，以1∶250體積比分別加入LB培養(yǎng)液中，30～32℃、180～220rpm振蕩培養(yǎng)45～48小時(shí)，然后4000rpm離心10～15min，棄上清得濕菌沉淀；

(3)合劑復(fù)配：分別取兩種濕菌與相應(yīng)的菌體保藏液按1g∶40ml配成兩種細(xì)菌單劑，再將兩種細(xì)菌單劑按照各菌活菌數(shù)量(CFU/ml)比1∶1配成合劑。

其中，步驟(3)所述的合劑中活菌總濃度為1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

所述菌體保藏液配制方法為：

1)制備pH?6.8～10，每升含有0.01～0.2mol的無機(jī)鹽緩沖液或有機(jī)鹽緩沖液；

2)在上述緩沖液中加入非離子型或天然物表面活性劑，至表面活性劑濃度為0.001～5mol/L即得菌體保藏液。