[發明專利]一種防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑

有效

• 申請號: 201110288017.8
• 申請日: 2011-09-26
• 公開（公告）號: CN102428964A
• 公開（公告）日: 2012-05-02
• 發明（設計）人: 郭堅華;劉紅霞;王云鵬;鄭麗
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01N63/02
• 分類號: A01N63/02;A01P3/00;C12N1/20;C12R1/11;C12R1/01
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤

1.一種防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑，其特征在于含兩種有效細菌成分：分別是巨大芽孢桿菌(Bacillus?meqaterium)BS13，于2011年04月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC?NO.4734；腸桿菌(Enterobacter?sp.)BJN15，于2011年04月02日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏號為CGMCC?NO.4733；該合劑中所述的保藏號為CGMCC?NO.4734的巨大芽孢桿菌BS13與保藏號為CGMCC?NO.4733的腸桿菌BJN15的活菌數量比為1∶1，總活菌總濃度為1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

2.權利要求1所述的防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑的制備方法，其特征在于包含如下步驟：

(1)種子菌液的培養：分別將保藏號為CGMCC?NO.4734的巨大芽孢桿菌BS13和保藏號為CGMCC?NO.4733的腸桿菌BJN15接種到LB培養液中，在30～32℃、180～220rpm條件下培養至600nm處的OD值為0.5～0.8之間時結束培養，獲得種子菌液；

(2)濕菌制備：取步驟(1)中的種子菌液，以1∶250體積比分別加入LB培養液中，30～32℃、180～220rpm振蕩培養45～48小時，然后4000rpm離心10～15min，棄上清得濕菌沉淀；

(3)合劑復配：分別取兩種濕菌與相應的菌體保藏液按1g∶40ml配成兩種細菌單劑，再將兩種細菌單劑按照各菌活菌數量(CFU/ml)比1∶1配成合劑。

3.根據權利要求2所述的防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑的制備方法，其特征在于步驟(3)所述的合劑中活菌總濃度為1×10⁹～10¹⁰cfu/ml。

4.根據權利要求2所述的防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑的制備方法，其特征在于，所述的菌體保藏液通過如下方法制備：

1)制備pH?6.8～10，每升含有0.01～0.2mol的無機鹽緩沖液或有機鹽緩沖液；

2)在上述緩沖液中加入非離子型或天然物表面活性劑，至表面活性劑濃度為0.001～5mol/L即得菌體保藏液。

5.根據權利要求4所述的防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑的制備方法，其特征在于所述的無機鹽緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、焦磷酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液、硼酸鹽緩沖液；所述的有機鹽緩沖液選自甲酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、酒石酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷以及檸檬酸鹽有機緩沖液。

6.根據權利要求4所述的防治黃瓜霜霉病的生防復合菌劑CB28合劑的制備方法，其特征于所述的非離子型選自聚氧乙基脂肪酸酯、烷基聚氧乙基醚、Tween20，天然物表面活性劑選自皂莢以及其它含有環戊烷菲基團的天然物表面活性劑。

7.權利要求1所述的CB28合劑在防治黃瓜霜霉病中的應用。