[發明專利]豬圓環病毒Ⅱ型、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒的多重PCR檢測及其專用引物

有效

• 申請號: 201110283930.9
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102329893A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 李云崗;杜蘭榮;張棟;孫圣福;蘭鄒然
• 申請（專利權）人: 山東省動物疫病預防與控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種豬圓環病毒II型、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒的多重PCR檢測及其專用引物。

背景技術

豬圓環病毒II(PCVII)，豬細小病毒(PPV)和豬偽狂犬病毒(PRV)的PCR檢測方法是目前快速檢測這三種病原的常用方法，被廣泛應用于實驗室病原診斷，與病毒分離的方法相比較，PCR方法診斷更快速簡便，病毒分離相對來說時間太長，在臨床上不利于快速診斷，所以目前病毒病的實驗室診斷主要應用PCR/RT-PCR方法。目前有一些PCVII，PPV，PRV的PCR試劑盒已經商品化并投入臨床應用。

目前豬病多病毒混合感染相當嚴重。商品化的PCVII、PPV、PRV的PCR試劑盒都是單項PCR，1個試劑盒1次試驗僅能檢測一種病毒，對于混合感染了PCVII、PPV、PRV的同份豬病料要確診病原就需要3種試劑盒并且要做3次PCR實驗，不僅費時費力，檢測成本也較高，既不經濟也不快捷。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測病毒的專用引物。

本發明提供的檢測病毒的專用引物，包括引物對A、引物對B和引物對C，

所述引物對A包括引物1和引物2，

所述引物對B包括引物3和引物4，

所述引物對C包括引物5和引物6，

所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分別為序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。

所述專用引物由引物對A、引物對B和引物對C組成，

所述引物對A由引物1和引物2組成，

所述引物對B由引物3和引物4組成，

所述引物對C由引物5和引物6組成。

所述引物對A、所述引物對B和所述引物對C可獨立包裝。

所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒(PPV)和豬偽狂犬病毒。

本發明的第二個目的是提供一種制備檢測病毒的PCR試劑。

本發明提供的PCR試劑，由所述的專用引物中的引物對A、引物對B、引物對C、dNTP、DNA聚合酶和PCR緩沖液組成；

所述專用引物中所述引物對A的各引物在所述PCR試劑中的終濃度各為2.0μM，所述引物對B的各引物在所述PCR試劑中的終濃度0.8μM，所述引物對C的各引物在所述PCR試劑中的終濃度1.5μM；

每種所述dNTP在所述PCR試劑中的終濃度均為0.2mM；

所述DNA聚合酶在所述PCR試劑中的終濃度均為0.05U/μL。

所述dNTP、DNA聚合酶和PCR緩沖液購自天根生化科技有限公司，產品目錄號為ET101。

所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒(PPV)和豬偽狂犬病毒。

本發明的第三個目的是提供一種制備檢測病毒的試劑盒。

本發明提供的試劑盒為含有所述的PCR試劑的試劑盒。

所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒(PPV)和豬偽狂犬病毒。

所述專用引物或所述試劑或所述試劑盒在檢測病毒或制備檢測檢測病毒產品中的應用；所述病毒具體為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒。

本發明的第四個目的是提供一種檢測或輔助檢測待測樣本病毒的方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：

用所述引物或所述試劑或所述試劑盒中的所述引物對A、引物對B和引物對C對待測樣本進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；檢測擴增產物，

若僅得到大小為1265bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II；

若僅得到大小為748bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬細小病毒；

若僅得到大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬偽狂犬病毒；

若得到大小為1265bp的PCR產物和大小為748bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II和豬細小病毒；

若得到大小為1265bp的PCR產物和大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II和豬偽狂犬病毒；

若得到大小為748bp的PCR產物和大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬細小病毒和豬偽狂犬病毒；