[發明專利]豬圓環病毒Ⅱ型、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒的多重PCR檢測及其專用引物

有效

• 申請號: 201110283930.9
• 申請日: 2011-09-22
• 公開（公告）號: CN102329893A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 李云崗;杜蘭榮;張棟;孫圣福;蘭鄒然
• 申請（專利權）人: 山東省動物疫病預防與控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種檢測病毒的專用引物，包括引物對A、引物對B和引物對C，

所述引物對A包括引物1和引物2，

所述引物對B包括引物3和引物4，

所述引物對C包括引物5和引物6，

所述引物1、所述引物2、所述引物3、所述引物4、所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分別為序列表中的序列1、序列2、序列3、序列4、序列5和序列6。

2.根據權利要求2所述專用引物，其特征在于：所述專用引物由引物對A、引物對B和引物對C組成，

所述引物對A由引物1和引物2組成，

所述引物對B由引物3和引物4組成，

所述引物對C由引物5和引物6組成。

3.根據權利要求1或2所述專用引物，其特征在于：所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒。

4.一種制備檢測病毒的PCR試劑，由權利要求1-3中任一所述的專用引物中的引物對A、引物對B、引物對C、dNTP、DNA聚合酶和PCR緩沖液組成；

所述專用引物中所述引物對A的各引物在所述PCR試劑中的終濃度各為2.0μM，所述引物對B的各引物在所述PCR試劑中的終濃度0.8μM，所述引物對C的各引物在所述PCR試劑中的終濃度1.5μM；

每種所述dNTP在所述PCR試劑中的終濃度均為0.2mM；

所述DNA聚合酶在所述PCR試劑中的終濃度均為0.05U/μL。

5.根據權利要求4所述PCR試劑，其特征在于：所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒。

6.一種制備檢測病毒的試劑盒，為含有權利要求4或5所述的PCR試劑的試劑盒。

7.根據權利要求6所述試劑盒，其特征在于：所述病毒為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒。

8.權利要求1-3中任一所述引物或權利要求4或5所述試劑或權利要求6或7所述試劑盒在檢測病毒或制備檢測檢測病毒產品中的應用；所述病毒具體為如下3種病毒中的至少一種：豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒。

9.一種檢測或輔助檢測待測樣本病毒的方法，包括如下步驟：

權利要求1-3中任一所述引物或權利要求4或5所述試劑或權利要求6或7所述試劑盒中的所述引物對A、引物對B和引物對C對待測樣本進行PCR擴增，得到PCR擴增產物；檢測擴增產物，

若僅得到大小為1265bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II；

若僅得到大小為748bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬細小病毒；

若僅得到大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬偽狂犬病毒；

若得到大小為1265bp的PCR產物和大小為748bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II和豬細小病毒；

若得到大小為1265bp的PCR產物和大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II和豬偽狂犬病毒；

若得到大小為748bp的PCR產物和大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬細小病毒和豬偽狂犬病毒；

若得到大小為1265bp的PCR產物、大小為748bp的PCR產物和大小為342bp的PCR產物，則樣本中含有或候選含有豬圓環病毒II、豬細小病毒和豬偽狂犬病毒；

所述1265bp的PCR產物的核苷酸序列為序列表中的序列7；

所述748bp的PCR產物的核苷酸序列為序列表中的序列8；

所述342bp的PCR產物的核苷酸序列為序列表中的序列9；

所述PCR擴增中，以待測樣本的基因組DNA為模板；

所述PCR擴增的退火溫度為55℃-60℃，所述PCR擴增的退火溫度具體為58℃；

所述檢測擴增產物的方法為瓊脂糖凝膠電泳或測序。

10.一種檢測圓環病毒II的引物對，由引物1和引物2組成，所述引物1和所述引物2的核苷酸序列分別為序列表中的序列1和序列2；

或一種檢測豬偽狂犬病毒的引物對，由引物5和引物6組成，所述引物5和所述引物6的核苷酸序列分別為序列表中的序列5和序列6。