[發(fā)明專利]檢測(cè)脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110279228.5
• 申請(qǐng)日: 2011-09-20
• 公開（公告）號(hào): CN102321726A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳曉波;黃家學(xué);韓洪起;侯士芳;張宇光;韓俊領(lǐng);陳勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 協(xié)和干細(xì)胞基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04
• 代理公司: 天津才智專利商標(biāo)代理有限公司 12108
• 代理人: 王曉紅

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種細(xì)胞種類檢測(cè)試劑盒，尤其是一種檢測(cè)脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

當(dāng)前對(duì)于干細(xì)胞的研究是一個(gè)研究熱點(diǎn)，無(wú)論是胚胎干細(xì)胞(ES)還是成體干細(xì)胞以及當(dāng)前非常熱門的人工誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(IPS)，在研究過程中一般都要對(duì)細(xì)胞的多能性進(jìn)行檢測(cè)，也就是要在體外誘導(dǎo)成為不同種類的成體細(xì)胞。這就需要有簡(jiǎn)單而且直接的檢測(cè)方法，例如細(xì)胞特異性表達(dá)蛋白的檢測(cè)。但是現(xiàn)有的檢測(cè)方法雖然原理相同，但是操作方法卻各不相同，沒有一套簡(jiǎn)單、高效的檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是，提供了一套簡(jiǎn)單、靈敏的檢測(cè)各種成體細(xì)胞的試劑，用于各種成體細(xì)胞組織特異性的檢測(cè)，包括脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種檢測(cè)脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒，包括A、B、C、D、E、F液，各溶液成分及質(zhì)量百分比如下：

溶液A：8％氯化鈉，2.16％磷酸氫二鈉，0.2％氯化鉀，0.2％磷酸二氫鉀，89.44％ddH₂O；

溶液B：4％多聚甲醛，96％ddH₂O；

溶液C：6％油紅O染料，94％無(wú)水乙醇；

溶液D：1％阿爾辛藍(lán)染料，99％冰醋酸；

溶液E：0.1％茜素紅染料，99％ddH₂O；

溶液F：0.3％蘇木精染料，25％冰醋酸，硫酸鋁鉀0.7％，17％甘油，30％ddH₂O，27％無(wú)水乙醇。

所述檢測(cè)脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞和軟骨細(xì)胞的檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，包括以下步驟：

(4)檢測(cè)脂肪細(xì)胞染色：

a.使用溶液A清洗細(xì)胞3次，用量依培養(yǎng)器皿大小而定；

b.加入適量溶液B至完全覆蓋細(xì)胞，室溫下靜置10min；

c.以溶液A清洗細(xì)胞3次；

d.將溶液C與ddH₂O按照體積比7∶3混合后加入細(xì)胞培養(yǎng)板中，室溫靜置30min；

e.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色；

f.加入適量溶液F，室溫靜置20min；

g.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色，加入適量溶液A覆蓋細(xì)胞。顯微鏡下觀察；

(5)檢測(cè)軟骨細(xì)胞染色：

a.使用溶液A清洗細(xì)胞3次，用量依培養(yǎng)器皿大小而定；

b.加入適量溶液B至完全覆蓋細(xì)胞，室溫下靜置10min；

c.以溶液A清洗細(xì)胞3次；

d.加入適量溶液D覆蓋細(xì)胞，室溫靜置15min；

e.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色；

f.加入適量溶液F，室溫靜置20min；

g.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色，加入適量溶液A覆蓋細(xì)胞。

顯微鏡下觀察；

(6)成骨細(xì)胞染色：

a.使用溶液A清洗細(xì)胞3次，用量依培養(yǎng)器皿大小而定；

b.加入適量溶液B至完全覆蓋細(xì)胞，室溫下靜置10min；

c.以溶液A清洗細(xì)胞3次；

d.加入適量溶液E覆蓋細(xì)胞，室溫靜置10min；

e.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色；

f.加入適量溶液F，室溫靜置20min；

g.以溶液A清洗細(xì)胞至流出液無(wú)色，加入適量溶液A覆蓋細(xì)胞。

顯微鏡下觀察。

本發(fā)明的有益效果是：利用這個(gè)細(xì)胞檢測(cè)試劑盒，能夠在最短的時(shí)間內(nèi)、以最為簡(jiǎn)單的操作檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞。為相關(guān)的細(xì)胞研究提供了便利的條件。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的試劑盒用于脂肪細(xì)胞染色(A為脂肪誘導(dǎo)細(xì)胞，B為對(duì)照細(xì)胞)。

圖2是本發(fā)明的試劑盒用于軟骨細(xì)胞染色(A為軟骨細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞，B為對(duì)照細(xì)胞)。

圖3是本發(fā)明的試劑盒用于成骨細(xì)胞染色(A為對(duì)照細(xì)胞，B為成骨細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞)。

具體實(shí)施方式

隨著對(duì)干細(xì)胞的研究不斷升溫，對(duì)于干細(xì)胞的多向分化能力的檢測(cè)是研究過程中不可缺少的部分，而本試劑盒就提供了一套簡(jiǎn)單、靈敏的檢測(cè)各種成體細(xì)胞的試劑，用于各種成體細(xì)胞特異性表達(dá)蛋白的檢測(cè)：

(1)脂肪細(xì)胞檢測(cè)：通過對(duì)細(xì)胞進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理后利用油紅O染色的方法特異性檢測(cè)脂肪滴

(2)成骨細(xì)胞檢測(cè)：對(duì)細(xì)胞進(jìn)行簡(jiǎn)單的處理后通過茜素紅染料染色，在顯微鏡下觀察。