[發(fā)明專利]一種來(lái)源于納豆的脂肪酶抑制劑及其制備方法和用途

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110278595.3
• 申請(qǐng)日: 2007-09-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102579507A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-07-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 段震文;郭樹(shù)仁;何大林;閆雪秋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京北大維信生物科技有限公司
• 主分類號(hào): A61K35/74
• 分類號(hào): A61K35/74;A61K45/00;A61P3/04
• 代理公司: 北京太兆天元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11108
• 代理人: 張韜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種脂肪酶抑制劑及其用途，特別涉及一種來(lái)源于納豆的脂肪酶抑制劑及其用途。本申請(qǐng)是申請(qǐng)?zhí)枮?00710175440.0的分案申請(qǐng)。?

背景技術(shù)

隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展、人們生活水平的提高以及生活方式的改變，肥胖已成為全球成年人最大的慢性疾病。?

據(jù)研究報(bào)道，肥胖與許多現(xiàn)代疾病直接相關(guān)，肥胖者患心腦血管疾病、糖尿病、高血壓、冠心病、膽囊疾病、痛風(fēng)、呼吸道疾病、和某些腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)很大，而高血脂、內(nèi)臟脂肪更是諸多生活習(xí)慣病的元兇，因此肥胖不僅影響人的外觀體型，而且嚴(yán)重威脅到了人類的健康。?

目前，美國(guó)FDA只批準(zhǔn)了2種藥物可以長(zhǎng)期用于肥胖癥治療：西布曲明(Sibutramine)和奧利司他(Orlistat)。西布曲明是一種單胺類神經(jīng)遞質(zhì)再攝取抑制劑，它作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)以減少攝食而降低體重，但該藥可能引起患者血壓升高、心率加快，且不能用于冠心病、心率失常和卒中等病史的患者中，使該藥應(yīng)用受到限制。?

肥胖癥和高膽固醇血癥在一定程度上與脂肪攝入有關(guān)，飲食脂肪在胃腸道被脂肪酶尤其是胰脂肪酶水解為脂肪酸和甘油三酯才能被人體吸收。因此，對(duì)胰脂肪酶的抑制可以導(dǎo)致對(duì)脂肪吸收的抑制，進(jìn)而達(dá)到減肥降脂的目的。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于公開(kāi)一種來(lái)源于枯草芽孢桿菌屬(Bacillussubtilis)微生物，尤其是納豆芽孢桿菌(Bacillus?subtilis?natto或Bacillus?natto)的脂肪酶抑制劑，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于公開(kāi)這種脂肪酶抑制劑的制備方法及用途。?

本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：?

本發(fā)明脂肪酶抑制劑的制備方法如下：?

將納豆芽孢桿菌(保藏于“中國(guó)微生物菌種保存管理委員會(huì)普通微生物中心”，位于北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏號(hào)為CGMCC2186，保藏日期：2007年9月25日)，在瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行活化培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度30-40℃，培養(yǎng)時(shí)間為16-48小時(shí)；將活化后的納豆芽孢桿菌轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)16-48小時(shí)；再將上述培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)基中的種子液移至固體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)16-144小時(shí)，或移至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)16-144小時(shí)，培養(yǎng)溫度為30-40℃，液體培養(yǎng)pH控制范圍4-9，即可得到含有抑制脂肪酶的活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的培養(yǎng)物；再用已知的提取分離技術(shù)獲取和分離：?

對(duì)于固體發(fā)酵，在上述培養(yǎng)物中加入1-5重量倍的50％-95％乙醇，超聲30-90分鐘，濾出提取液，再加入1-3重量倍的50％-95％乙醇，第二次超聲30-90分鐘，濾出提取液，合并兩次乙醇提取液；用60℃-90℃水浴薄膜減壓蒸發(fā)濃縮，將濃縮液用1-4倍體積乙酸乙酯萃取三次，合并三次乙酸乙酯萃取液，用50℃-90℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至膏狀，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的乙酸乙酯萃取濃縮物；?

對(duì)于液體發(fā)酵，將上述培養(yǎng)物離心，得離心清液和濕菌體沉淀；離心清液用80℃-100℃水浴薄膜減壓蒸發(fā)濃縮，得濃縮液；將濃縮液用1-3倍體積氯仿萃取三次，合并三次氯仿萃取液，用50℃-90℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮氯仿萃取液，濃縮至膏狀，得含有脂肪酶抑制活性成分的氯仿萃取物；濕菌體沉淀放-10℃--30℃冰箱冷凍15-30小時(shí)，置室溫解凍后加入1-3倍體積倍甲醇，超聲提取2次，每次30-90分鐘；合并兩次提取液，用40℃-70℃水浴減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至無(wú)醇味，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的甲醇提取濃縮物。?

本發(fā)明脂肪酶抑制劑的優(yōu)選制備方法如下：?

將納豆芽孢桿菌(保藏于“中國(guó)微生物菌種保存管理委員會(huì)普通微生物中心”，位于北京市朝陽(yáng)區(qū)大屯路，中國(guó)科學(xué)院微生物研究所；保藏號(hào)為CGMCC2186，保藏日期：2007年9月25日)，在瓊脂斜面培養(yǎng)基上進(jìn)行活化，培養(yǎng)溫度37℃±1℃，培養(yǎng)時(shí)間為22-26小時(shí)；將活化后的納豆芽孢桿菌轉(zhuǎn)入種子培養(yǎng)基中培養(yǎng)20-24小時(shí)；將上述培養(yǎng)好的種子培養(yǎng)基中的種子液移至固體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)68-96小時(shí)，或移至液體發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)68-96小時(shí)，培養(yǎng)溫度均為37℃±1℃，液體發(fā)酵pH控制范圍為4.5-8.5，即可得到含有脂肪酶抑?制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的培養(yǎng)物；再用已知的提取分離技術(shù)獲取和分離：?