[發明專利]一種來源于納豆的脂肪酶抑制劑及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201110278595.3
• 申請日: 2007-09-29
• 公開（公告）號: CN102579507A
• 公開（公告）日: 2012-07-18
• 發明（設計）人: 段震文;郭樹仁;何大林;閆雪秋
• 申請（專利權）人: 北京北大維信生物科技有限公司
• 主分類號: A61K35/74
• 分類號: A61K35/74;A61K45/00;A61P3/04
• 代理公司: 北京太兆天元知識產權代理有限責任公司 11108
• 代理人: 張韜

1.一種脂肪酶抑制劑，其特征在于該脂肪酶抑制劑來源于枯草芽孢桿菌屬微生物，尤其是納豆芽孢桿菌。

2.如權利要求1所述的脂肪酶抑制劑，其特征在于該脂肪酶抑制劑由如下方法制成：將納豆芽孢桿菌，在瓊脂斜面培養基上進行活化培養，培養溫度30-40℃，培養時間為16-48小時；將活化后的納豆芽孢桿菌轉入種子培養基中培養16-48小時；再將上述培養好的種子培養基中的種子液移至固體發酵培養基中培養16-144小時，或移至液體發酵培養基中培養16-144小時，培養溫度為30-40℃，液體培養pH控制范圍4-9，即可得到含有抑制脂肪酶的活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的培養物；再用已知的提取分離技術獲取和分離；

對于固體發酵，在上述培養物中加入1-5重量倍的50％-95％乙醇，超聲30-90分鐘，濾出提取液，再加入1-3重量倍的50％-95％乙醇，第二次超聲30-90分鐘，濾出提取液，合并兩次乙醇提取液；用60℃-90℃水浴薄膜減壓蒸發濃縮，將濃縮液用1-4倍體積乙酸乙酯萃取三次，合并三次乙酸乙酯萃取液，用50℃-90℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮至膏狀，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的乙酸乙酯萃取濃縮物；

對于液體發酵，將上述培養物離心，得離心清液和濕菌體沉淀；離心清液用80℃-100℃水浴薄膜減壓蒸發濃縮，得濃縮液；將濃縮液用1-3倍體積氯仿萃取三次，合并三次氯仿萃取液，用50℃-90℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮氯仿萃取液，濃縮至膏狀，得含有脂肪酶抑制活性成分的氯仿萃取物；濕菌體沉淀放-10℃--30℃冰箱冷凍15-30小時，置室溫解凍后加入1-3倍體積倍甲醇，超聲提取2次，每次30-90分鐘；合并兩次提取液，用40℃-70℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮至無醇味，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的甲醇提取濃縮物。

3.如權利要求2所述的脂肪酶抑制劑，其特征在于該脂肪酶抑制劑由如下方法制成：將納豆芽孢桿菌，在瓊脂斜面培養基上進行活化，培養溫度37℃±1℃，培養時間為22-26小時；將活化后的納豆芽孢桿菌轉入種子培養基中培養20-24小時；將上述培養好的種子培養基中的種子液移至固體發酵培養基中培養68-96小時，或移至液體發酵培養基中培養68-96小時，培養溫度均為37℃±1℃，液體發酵pH控制范圍為4.5-8.5，即可得到含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的培養物；再用已知的提取分離技術獲取和分離；

對于固體發酵，在上述培養物中加入2.5重量倍的95％乙醇，超聲60分鐘，濾出提取液，再加入2重量倍的80％乙醇，第二次超聲60分鐘，濾出提取液，合并兩次乙醇提取液；用80℃水浴薄膜減壓蒸發濃縮，將濃縮液用2-3倍體積乙酸乙酯萃取三次，合并三次乙酸乙酯萃取液，用70℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮至膏狀，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的乙酸乙酯萃取濃縮物；

對于液體發酵，將上述培養物離心，得離心清液和濕菌體沉淀；離心清液用80-100℃水浴薄膜減壓蒸發濃縮，得濃縮液；將濃縮液用2倍體積氯仿萃取三次，合并三次氯仿萃取液，用70℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮氯仿萃取液，濃縮至膏狀，得氯仿萃取物；濕菌體沉淀放-20℃冰箱冷凍24小時，置室溫解凍后加入2-3體積倍甲醇，超聲提取2次，每次60分鐘；合并兩次提取液，用60℃水浴減壓旋轉蒸發濃縮至無醇味，得含有脂肪酶抑制活性成分，即納豆脂肪酶抑制素的甲醇提取濃縮物。

4.如權利要求2或3所述的脂肪酶抑制劑，其特征在于培養基可以包含一種或多種碳源和一種或多種氮源和任選營養無機鹽和/或微量元素：碳源包括但不限于淀粉、葡萄糖、蔗糖、糊精、糖蜜、甘油，優選葡萄糖；氮源包括但不限于大豆、大豆粉、大豆餅粉、花生粉、花生餅粉、酵母提取物、牛肉提取物、蛋白胨、大豆蛋白胨、麥芽提取物、玉米漿，固體培養優選大豆，液體培養優選大豆蛋白胨；營養無機鹽包括但不限于磷酸鹽：磷酸氫鈉、磷酸氫鉀、磷酸氫銨、氯化鈉、氯化鈣、硫酸鎂、硝酸鉀、硫酸銨、碳酸鈣，優選磷酸氫鈉、氯化鈣和硫酸鎂。

5.如權利要求2或3所述的脂肪酶抑制劑，其特征在于提取分離技術中所使用的乙醇、乙酸乙酯、氯仿、甲醇等溶劑可以用其他水不混溶劑：如乙酸丁酯、二氯甲烷或水可混溶劑：如丙酮、乙腈、正丙醇、正丁醇、異丙醇代替。