[發明專利]一種快速檢測人白細胞抗原B27的方法及其試劑盒

有效

• 申請號: 201110278164.7
• 申請日: 2011-09-19
• 公開（公告）號: CN102443625A
• 公開（公告）日: 2012-05-09
• 發明（設計）人: 商純爾;張偉林
• 申請（專利權）人: 浙江夸克生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 杭州宇信知識產權代理事務所(普通合伙) 33231
• 代理人: 張宇娟

技術領域

本發明屬臨床醫學生物檢測技術領域，具體涉及一種快速人白細胞抗原B27(HLA-B27)的試劑盒及檢測方法。?

背景技術

在組織或器官移植中，供者與受者之間相容(不排斥)還是不相容(排斥)都是由它們組織特異性所決定的。這種代表個體特異性的組織抗原稱組織相容性抗原，一套這樣的抗原系統稱主要組織相容性系統(major?histocompatibility?system，MHS)。編碼MHS的基因群稱為主要組織相容性復合體MHC即指某一染色體上一群緊密連鎖的基因群。?

人的MHC就稱人類白細胞抗原(human?leukocyte?antigen，HLA)，HLA作為抗原研究時，稱HLA抗原系統；HLA作為基因研究時稱HLA復合體，它位于第6號染色體短臂上6p21.3，全長4000kb。它是為200個以上基因座位組成的基因復合體；是迄今已知基因中等位基因多態性最高的基因復合體；其多態性與疾病的遺傳易感性有明顯關系。HLA有I類、II類和III類基因，HLA-B是I類HLA的三個位點(HLA-A、HLA-B、HLA-C)之一。?

HLA-B27是位于人第6號染色體HLA基因B座位的一個等位基因。強直性脊柱炎(ankylosing?spondylitis，AS)患者HLA-B27陽性率高達94％，而正常人群僅為9％。對疑似AS患者進行HLA-B27檢測，已成為臨床重要的輔助診斷手段。目前HLA-B27檢測手段主要有血清學方法如微量淋巴細胞毒試驗(CDC)、流式細胞儀檢測、ELISA法、引物特異性聚合酶鏈反應(SSP-PCR)等。傳統的血清學方法，由于很難獲得高質量單價抗血清，單份血清很容易漏檢或出現假陽性，而采用多份血清又常常會遇到部分血清陽性時難以判斷結果的現象。ELISA法操作繁瑣，費時，不利于大批量臨床標本檢測；流式細胞儀檢測具有較高的靈敏度和特異性，但需要配置流式細胞儀，硬件需求高，且檢測結果受標本的質量、抗體的效價影響，容易產生假陽性或假陰性。SSP-PCR靈敏度和特異性均較好，但產物需電泳，操作繁瑣，且也有一定的假陽性或假陰性。?

實時熒光定量PCR技術(Real-time?quantitative?Polymerase?Chain?Reaction?簡稱Real?Time?PCR)是在定性PCR技術基礎上發展起來的核酸定量技術，在PCR?反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過Ct值和標準曲線對樣品中的DNA(or?cDNA)的起始濃度進行定量的方法，分染料法和探針法兩類檢測方法。探針法實時熒光定量PCR在特異性引物的基礎上加入了一條與目的基因特異性匹配的探針(帶有熒光基團)，能顯著提高檢測的特異性，是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數最敏感、最準確的方法。該技術不僅實現了對DNA/RNA模板的定量，而且具有靈敏度和特異性高、能實現多重反應、自動化程度高、無污染、實時和準確等特點，該技術在醫學臨床檢驗及臨床醫學研究方面有著重要的意義。目前已有多種運用探針法定量PCR技術的試劑盒應用于臨床疾病相關的病原體檢測、基因分型、突變研究等。?

本試劑盒通過設計與HLA-B27基因完全匹配的1對特異性引物和1條Taqman水解熒光探針，用于快速準確的檢測HLA-B27基因。該方法相比目前應用于臨床的其它方法，具有特異性強、敏感性高、省時、省力、成本低廉及高通量等優點，可快速準確的檢測患者HLA-B27基因陰陽性，用于臨床強直性脊柱炎、Reiter綜合癥、銀屑病性關節炎、潰瘍性結腸炎伴關節病、急性前葡萄膜炎等許多嚴重危害人類健康的脊柱性關節病的輔助診斷。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種HLA-B27快速檢測的試劑盒。?

本發明還要解決的技術問題是提供上述試劑盒的檢測方法。?

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案如下：?

一種HLA-B27快速檢測的試劑盒，它包括：?

(1)1對擴增HLA-B27的特異性引物，其特征在于如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示引物對；?

(2)1條HLA-B27特異性熒光探針，其特征在于如SEQ?ID?NO：3所示核苷酸序列，在其5’端標記熒光報告基團FAM，在其3’端標記熒光淬滅基團TAMRA；?

在一次檢測中共同使用。?

上述HLA-B27快速檢測的試劑盒，具體包括如下試劑：?