[發(fā)明專利]一種快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的方法及其試劑盒有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110278164.7 | 申請日： | 2011-09-19 |
| 公開（公告）號： | CN102443625A | 公開（公告）日： | 2012-05-09 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 商純爾;張偉林 | 申請（專利權(quán)）人： | 浙江夸克生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州宇信知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 33231 | 代理人： | 張宇娟 |
| 地址： | 312500 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 檢測 白細(xì)胞 抗原 b27 方法 及其 試劑盒 | ||
1.一種快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的試劑盒，其特征在于它包括：
(1)1對擴增HLA-B27的特異性引物，其特征在于如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示引物對；
(2)1條HLA-B27特異性熒光探針，其特征在于如SEQ?ID?NO：3所示核苷酸序列，在其5’端標(biāo)記熒光報告基團FAM，在其3’端標(biāo)記熒光淬滅基團TAMRA；
(1)所述的引物對和(2)所述的特異性熒光探針在一次檢測中共同使用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的試劑盒，其特征在于它包括如下試劑：
(1)DNA提取液A：0.32M蔗糖，10mM?Tris-HCl?pH?7.5，5mM?MgCl2，0.1％(v/v)Triton?X-100，室溫保存；
(2)DNA提取液B：30mM?Tricine?pH?8.5，210mM辛酸鈉，2.5％(m/v)Chelex-100，-20℃保存；
(3)PCR反應(yīng)液：0.2μM引物對SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2，0.04μM熒光探針SEQ?ID?NO：3，30mM?Tricine?pH?8.9，0.05％(v/v)Tween-20，0.01％(m/v)明膠，0.03％(m/v)BSA，6.5mM?MgCl2，-20℃保存；
(4)5U/μlTaq?DNA聚合酶，-20℃保存；
(5)陽性對照品100ng/μl，-20℃保存；
(6)陰性對照品100ng/μl，-20℃保存。
3.一種快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的試劑盒，其特征在于它包括權(quán)利要求1所述的所有核苷酸序列的堿基互補序列，也就是包括：
(1)1對擴增HLA-B27的特異性引物，其特征在于如SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5所示引物對；
(2)1條HLA-B27特異性熒光探針，其特征在于如SEQ?ID?NO：6所示核苷酸序列，在其5’端標(biāo)記熒光報告基團FAM，在其3’端標(biāo)記熒光淬滅基團TAMRA；
(1)所述的引物對和(2)所述的特異性熒光探針在一次檢測中共同使用。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的試劑盒，其特征在于它包括如下試劑：
(1)DNA提取液A：0.32M蔗糖，10mM?Tris-HCl?pH?7.5，5mM?MgCl2，0.1％(v/v)Triton?X-100，室溫保存；
(2)DNA提取液B：30mM?Tricine?pH?8.5，210mM辛酸鈉，2.5％(m/v)Chelex-100，-20℃保存；
(3)PCR反應(yīng)液：0.2μM引物對SEQ?ID?NO：4和SEQ?ID?NO：5，0.04μM熒光探針SEQ?ID?NO：6，30mM?Tricine?pH?8.9，0.05％(v/v)Tween-20，0.01％(m/v)明膠，0.03％(m/v)BSA，6.5mM?MgCl2，-20℃保存；
(4)5U/μlTaq?DNA聚合酶，-20℃保存；
(5)陽性對照品100ng/μl，-20℃保存；
(6)陰性對照品100ng/μl，-20℃保存。
5.一種快速檢測人白細(xì)胞抗原B27的方法，其特征在于它包括如下步驟：
(1)提取外周血人基因組DNA；
(2)以步驟(1)所得DNA為模板，利用特異性引物和熒光探針進(jìn)行HLA-B27的熒光定量PCR檢測；
(3)參考陰陽性對照品，得出臨床標(biāo)本HLA-B27結(jié)果。
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