[發(fā)明專(zhuān)利]弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110277920.4
• 申請(qǐng)日: 2011-09-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102323420A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊天賜;張忠英;劉莉莉;林麗蓉;張長(zhǎng)弓
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廈門(mén)大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/531;G01N33/535
• 代理公司: 廈門(mén)南強(qiáng)之路專(zhuān)利事務(wù)所 35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于設(shè)有載體板、硝酸纖維膜、弓形蟲(chóng)總抗體檢測(cè)線、對(duì)照線，弓形蟲(chóng)總抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上；在弓形蟲(chóng)總抗體檢測(cè)線處包被弓形蟲(chóng)重組抗原，在對(duì)照線處包被人Ig抗體；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人Ig抗體。

2.如權(quán)利要求1所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于所述弓形蟲(chóng)重組抗原為SAG1(P30)、SAG2(P22)、ROP2、GRA7，但不限于以上抗原。

3.如權(quán)利要求1所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒，其特征在于所述載體板采用PVC板。

4.如權(quán)利要求1所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備弓形蟲(chóng)重組抗原

采用基因克隆技術(shù)，PCR擴(kuò)增編碼弓形蟲(chóng)螺旋體抗原的DNA，并插入大腸桿菌中使其表達(dá)，得弓形蟲(chóng)重組抗原；

2)硝酸纖維素膜的點(diǎn)樣

在硝酸纖維素膜總檢測(cè)線上包被弓形蟲(chóng)重組抗原，在對(duì)照線處包被人Ig抗體，晾干；

3)制備抗人Ig單克隆抗體

以人Ig為抗原免疫Balb/c小鼠，通過(guò)雜交瘤技術(shù)，篩選獲得穩(wěn)定分泌抗人Ig單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株；

4)抗人Ig單克隆抗體的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記

采用過(guò)碘酸鈉法進(jìn)行辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記；

5)制備免疫印跡試劑盒

將硝酸纖維膜粘貼在載體板上表面，弓形蟲(chóng)總抗體檢測(cè)線和對(duì)照線依次設(shè)在硝酸纖維膜上，在弓形蟲(chóng)總抗體檢測(cè)線處包被弓形蟲(chóng)重組抗原，在對(duì)照線處包被人Ig抗體，用切條機(jī)切成條狀，與酶標(biāo)記的抗人Ig單克隆抗體及其底物共同組裝成弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒。

5.如權(quán)利要求4所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述弓形蟲(chóng)重組抗原為SAG1(P30)、SAG2(P22)、ROP2、GRA7。

6.如權(quán)利要求4所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述弓形蟲(chóng)重組抗原和人Ig抗體的濃度為1～4mg/mL；點(diǎn)樣量為1μL/cm。

7.如權(quán)利要求4所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟3)中，采用ELISA的方法鑒定McAb效價(jià)在1∶10⁷以上。

8.如權(quán)利要求4所述的弓形蟲(chóng)總抗體免疫印跡試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述辣根過(guò)氧化物酶的底物按質(zhì)量/體積百分比由0.03％的過(guò)氧化氫和0.07％的二氨基聯(lián)苯胺組成。