[發明專利]弓形蟲總抗體免疫印跡試劑盒及其制備方法

無效

• 申請號: 201110277920.4
• 申請日: 2011-09-19
• 公開（公告）號: CN102323420A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 楊天賜;張忠英;劉莉莉;林麗蓉;張長弓
• 申請（專利權）人: 廈門大學附屬中山醫院
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/531;G01N33/535
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所 35200
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，尤其是涉及一種弓形蟲總抗體檢測免疫印跡試劑盒及其制備方法。

背景技術

弓形蟲病(Toxoplasmosis)是剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)引起的一種嚴重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病，其病原體弓形蟲可寄生在人及多種動物的有核細胞內，人群及動物普遍易感。該病廣泛分布于世界各地，據統計全球約有10億人被弓形蟲感染([1]奚琳琳，李威.弓形蟲致病機理，毒力及基因型研究進展[J].中國病原生物學雜志，2009，4(11)：859-861.)。弓形蟲病在我國分布很廣泛，全國各省、市、自治區均有弓形蟲感染的報道，我國正常人群平均感染率在4％～9％左右([2]劉敏，陳曉光.中國人群弓形蟲病的流行特征分析[J].寄生蟲與醫學昆蟲學報，2010，17(3)：131-134.)，特殊人群如腫瘤患者、精神病患者、先天缺陷嬰幼兒、免疫抑制、免疫缺陷患者感染率更高。所幸的是極大多數免疫功能正常的成人或兒童被弓形蟲感染后常無癥狀或僅有輕微癥狀，且多能自愈并獲永久免疫力。但先天感染的胎兒、兒童以及免疫缺陷者被感染后，則預后極為嚴重。是造成艾滋病患者死亡的一個重要并發病。人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者約有20％～80％合并弓形蟲感染，更重要的是它也是造成人類先天畸形、缺陷、智力低下、死胎、早產的重要病原體之一。

現有的弓形蟲病的診斷方法包括直接從臟器、血液、腦脊液等組織分離弓形蟲進行病原學診斷，需要幾天甚至幾周時間，費時費力，在實際應用中價值不大。臨床上常規檢測主要是應用各種血清學方法，檢測其特異IgG和IgM([3]周彬，張玨，王柯，等.弓形蟲IgG和IgM抗體雙標記時間分辨熒光免疫分析的建立及其初步臨床應用[J].中華檢驗醫學雜志，2010，33(010)：957-959.)，血清學方法可以診斷先天性、急性和慢性弓形蟲病，但由于大多數免疫缺陷的人或動物其抗弓形蟲的IgG滴度不會上升或不會出現高的IgM滴度，所以不能有效地用血清學方法對患有免疫缺陷的人或動物診斷弓形蟲病。另外，在抗原消失相當長時間后血清抗體滴度才會逐步下降，所以也不能應用于治療效果評價。目前檢測IgG抗體存在較高的假陽性，而IgM抗體檢測普遍靈敏度差等問題([4]韓靖云，劉倩，郭健.弓形蟲感染實驗室診斷的技術進展[J].檢驗醫學，2009，24(5)：393-395.)。因此，對疾病的早期診斷幫助不大，急需建立一種具有高度敏感性，且價廉、快速、操作簡單、不需特殊設備，更適合于臨床的早期診斷方法。

弓形蟲病的診斷與流行病學調查主要依賴于血清學試驗，正常人體感染弓形蟲多為隱性感染，當機體免疫力下降時，蟲體大量繁殖，侵入除紅細胞外的各組織細胞內寄生，造成各種組織的廣泛炎癥，從而出現臨床癥狀。人類感染弓形蟲后能誘導產生特異性抗體。感染早期IgM抗體增高，IgM在感染4個月后逐漸消失，在感染1個月后出現高濃度IgG抗體([5]KASPER?D?C，PRUSA?A?R，HAYDE?M，et?al.Evaluation?of?the?vitros?eciq?immunodiagnostic?system?for?detection?of?anti-toxoplasma?immunoglobulin?g?and?immunoglobulin?m?antibodies?for?confirmatory?testing?for?acute?toxoplasma?gondii?infection?in?pregnant?women[J].Journal?of?clinical?microbiology，2009，47(1)：164-168.)。因此，弓形蟲IgG抗體是弓形蟲病診斷和流行病學調查的一項重要指標。

早期的血清學方法使用弓形蟲循環抗原。研究和診斷用的弓形蟲循環抗原是以弓形蟲感染小鼠腹腔獲得，這種方法花費大、獲得的抗原量少且不純(常混有宿主蛋白)，因此假陽性也時有發生。隨著分子生物學技術的普及及弓形蟲抗原的相繼克隆，將重組抗原應用于弓形蟲實驗已經越來越多。目前研究比較多的弓形蟲的表面抗原(SAG1(P30)、SAG2(P22)、SAG3(P43)、SAG4(P18))、蟲體棒狀體抗原(ROP1、ROP2)、致密顆粒蛋白(GRA1、GRA7)等([6]熊美華，王秀珍，劉露霞，等.弓形蟲速殖子抗原的提取及蛋白分析[J].中國寄生蟲病防治雜志，2001，14(3)：237-238.)。采用重組DNA技術制備的重組抗原可以克服完整弓形蟲抗原的缺點，能快速、經濟地制備無限量特異重組弓形蟲抗原。