[發明專利]一種豬細小病毒滅活疫苗的制備方法

無效

• 申請號: 201110276105.6
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102688485A
• 公開（公告）日: 2012-09-26
• 發明（設計）人: 潘杰;范娟;沈明君;傅元華;錢鐘
• 申請（專利權）人: 揚州優邦生物制藥有限公司
• 主分類號: A61K39/23
• 分類號: A61K39/23;A61P31/20
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立

技術領域

本發明涉及一種豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，尤其是一種豬細小病毒滅活疫苗的純化、濃縮工藝的設計方法，屬于生物工程技術領域。

背景技術

豬細小病毒(PPV)能夠引起母豬繁殖障礙疾病，導致母豬產死胎、木乃伊胎、早期胚胎死亡和母豬不育等。目前該病已呈世界性分布，給養豬業造成了嚴重的經濟損失。德國學者Mayr首次最早發現了PPV，我國學者潘雪珠等1983年成功實現該病毒的分離。

目前PPV疫苗主要包括滅活疫苗、弱毒疫苗、基因工程亞單位疫苗、基因工程活病毒載體疫苗等，其中滅活疫苗具有安全性好、產生抗體時間長、不需要低溫保存的優點；弱毒疫苗免疫效力較強、產生抗體快、用量少、成本低，但安全性較差；基因工程亞單位疫苗免疫源性較好，但成本和技術要求都比較高；基因工程活病毒載體疫苗可以同時預防兩種病或多種病的、能夠誘導較強的免疫反應，但生產技術復雜、成本較高；基因疫苗生產工藝簡單、免疫劑量小、成本低廉、可構建多基因或多價疫苗，但其安全性受到廣泛關注。由于滅活疫苗的存在上述優點，因此該方法得到了廣泛的應用。

我國均普遍使用豬細小病毒滅活疫苗，使用的主要滅活劑有福爾馬林、β-丙內酯(β-PL)、N-乙酰乙烯亞胺(AEI)、二乙烯亞胺(BEI)等。有試驗表明，豬細小病毒用福爾馬林滅活后制成疫苗的保護效果不如用N-乙酰乙烯亞胺滅活后制成疫苗的保護效果好；用β-丙內酯滅活疫苗的保護力較好。免疫佐劑也是影響豬細小病毒滅活疫苗免疫效果的重要因素，但幾種佐劑的混合物，如油佐劑、SDS、L-121、氫氧化鋁和油乳劑的混合物以及SDS、氫氧化鋁的混合物作佐劑的疫苗產生的抗體滴度均較低。目前經常采用的佐劑是蜂膠、氫氧化鋁和油水乳劑。豬細小病毒滅活多聯疫苗的使用較為廣泛，主要有豬細小病毒-豬偽狂犬病病毒、豬細小病毒-乙腦病毒等二聯苗，因為除了豬細小病毒外，豬偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸綜合征障礙病毒(PRRSV)、乙腦病毒(JEV)等均能引起母豬的繁殖障礙，而且多聯苗的使用可以簡化免疫程序，降低臨床應激反應，適合規模化養豬。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種解決豬細小病毒的濃縮、純化及滅活的工藝設計問題；提供一種安全可行的疫苗生產方法，使該疫苗的生產能夠不再依賴傳統工藝從而生產出高滴度的毒液，提高抗原含量，滿足免疫生產要求。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：

一種豬細小病毒滅活疫苗的制備方法，包括以下步驟：

(1)將豬細小病毒液從原料罐中放入微濾系統進行過濾，得到滲透液及濃縮液，所述滲透液中不含有細菌及細胞碎片雜質，所述濃縮液返回原料罐，當豬細小病毒液固含量大于或等于1g/L后，將豬細小病毒液排出；

(2)將通過步驟(1)處理的滲透液，進行超濾處理，進一步濃縮毒液，直到病毒血凝價達到到2⁸～2¹³時停止濃縮，得到濃縮液；

(3)將步驟(2)處理完的濃縮液用微濾系統再過濾，處理完后得到血凝價為2⁸～2¹³的細小病毒毒液；

(4)將步驟(3)得到的細小病毒毒液滅活及將濃縮及滅活后病毒液制備成疫苗產品。

血凝實驗(HA)是指病毒的血凝素，能選擇性地使某種或某幾種動物的紅細胞發生凝集，這種凝集紅細胞的現象成為血凝，也稱為直接雪凝反應，利用這種特性設計的實驗稱血凝實驗，病毒血凝價是指血凝試驗的檢測結果。

固含量，又叫“不揮發份含量”，是乳液或涂料在規定條件下烘干后剩余部分占總量的質量百分數。

在上述技術方案的基礎上，本發明還可以做如下改進。

進一步，所述微濾膜孔徑為100nm～220nm，超濾膜孔徑為5KD～200KD。

進一步，所述的微濾和超濾膜分離材料可以是有機膜材料也可以是無機膜材料。主要包括陶瓷材料、金屬材料及有機高分子材料。其中有機高分子主要有醋酸纖維素、磺化聚砜、磺化聚醚砜、聚酰胺、聚乙烯醇或聚哌嗪酰胺；無機氧化物材料主要有氧化鋁、氧化鈦、氧化鋯以及氧化鉿。

進一步，所述微濾及超濾的操作條件為溫度5～50℃，壓力0.01～0.5MPa，膜面流速1～5m/s。

進一步，在步驟(4)中，所述細小病毒毒液的滅活包括收集步驟(3)得到的細小病毒毒液，采用二乙烯亞胺作為滅活劑，滅活劑濃度為0.1％～1％，滅活溫度為25～38℃，滅活時間為24～120小時。