[發明專利]磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒及其提取核酸方法

無效

• 申請號: 201110275662.6
• 申請日: 2011-09-16
• 公開（公告）號: CN102417902A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發明（設計）人: 盤寶進;溫和心;謝永平
• 申請（專利權）人: 廣西出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄧曉安

技術領域

本發明涉及一種用于提取核酸的試劑盒及其提取核酸方法，具體涉及了一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒及其提取核酸方法。

背景技術

核酸是一類生物信息高分子化合物，自它首次被從細胞中分離出來，經歷了一百多年的歷史，直至上個世紀中期以后科學家對核酸結構和功能才取得了飛躍的發展。核酸分為脫氧核糖核酸和核糖核酸，核苷酸是核酸的基本單位。DNA和RNA在動植物種都有存在，但一種病毒只含有一種核酸，DNA或RNA。核酸在整個分子生物學中的所具有的無可替代的作用，自分子生物學創立以來，一直是分子生物學研究的主要對象。因此，核酸的提取和分離純化也是分子生物學各類實驗不可缺少的一個環節。在臨床診斷中，常從人體組織，如血清或血漿、組織切片中分離純化核酸，然后用于疾病的診斷和組織配型。

傳統的酚-氯仿法等化學方法提取核酸，該方法雖然提取的核酸得率高，純度好，但要使用到酚和氯仿等有毒有害物質，操作過程要反復開管加液、離心、棄液，頻繁更換離心管和吸咀，工作步驟冗長繁雜，致使提取工作效率低下。

隨著納米技術的發展，利用SiO₂（二氧化硅）包裹的納米磁珠在一定條件下特異吸附核酸的特性，開發出了磁珠提取純化核酸技術?，該技術得到了廣泛的應用。操作基本過程是樣品中的核酸與磁珠充分混合使核酸吸附到磁珠后，與磁珠一起在磁場的作用下與溶液分離，經過幾次洗滌后，用洗脫液使核酸與磁珠分離，磁珠再由磁場中從液相中分離出來，液相即為純化的核酸溶液。所以磁珠法提取核酸該技術利用磁珠的物理特性提取純化核酸，不使用有毒有害化學試劑，操作過程簡單，不用頻繁更換離心管和吸咀，不用離心，磁吸瞬間可以完成，核酸得率和純度優于酚～氯仿法等化學方法。磁珠法較傳統的酚-氯仿法等化學方法是革命性的技術革新。如公開號CN101684138A公開一種應用納米磁珠純化核酸的試劑盒，該試劑盒由裂解液、磁珠緩沖液、洗滌緩沖液1、洗滌緩沖液2、洗滌緩沖液3、洗脫緩沖液和平衡液組成；該發明提取核酸速度快、靈敏度高，并且比傳統核酸純化方法具有自動化升級的潛力，使得核酸提取的大規模集成化，均一性成為可行。但是現有的磁珠法提取核酸也存在以下缺點：1.由于在離心管中進行提取，需要反復開蓋加液、蓋蓋混勻，再開蓋棄液過程，當檢測量為幾十上百份樣時，反復開蓋極不方便。2.分子生物學檢測樣品用量一般為1～5微升,而常規一次提取量為50～100微升,與磁珠昂貴的成本比較，無疑存在較大的浪費。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足，提供了一種操作簡單、節約成本的磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒及其提取核酸方法。

為了實現上述目的，本發明采取以下技術解決法案：一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，包括盒體和試劑，盒體包括磁力板和可拆卸微孔板，可拆卸微孔板由孔架和微孔兩部分組成；微孔分單孔或多聯孔安置在孔架上；試劑包括磁珠、裂解-結合液、洗滌液A、洗滌液B和洗脫液。

所述微孔的制作材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。

所述微孔的孔底為“U”形或“V”形，微孔的容積為400微升以上。

所述磁力板為長方形釹鐵錋強磁片，形狀、尺寸與可拆卸微孔板底部適配。

所述磁珠為SiO₂?包裹的氧化鐵納米顆粒，所述裂解-結合液為異硫氰酸胍消化液，所述洗滌液A為75%無水乙醇水溶液，所述洗滌液B為無水乙醇，所述洗脫液為電導率≧18微西門子的純水，即超純水或雙蒸水。

所述試劑盒提取核酸的樣品為固體、液體或固-液混和物。

上述試劑盒中所有試劑均為工作液，可直接使用，磁珠液和裂解-結合液使用前充分搖勻；試劑盒在常溫條件下儲存和運輸，磁珠液與磁板存放距離至少10cm以上，有效期一年；本發明試劑與器械配合使用，不建議與其它試劑或器械混用。

使用本發明試劑盒提取核酸的方法如下：

1.將樣品與裂解-結合液放入離心管內充分作用后，在4000～10000轉/分的轉速下，離心5～15分鐘；

2.?取上清液50～200微升/孔放入微孔板的微孔中，記錄樣品對應的孔號，并用8通道微量移液器向微孔加入磁珠5～10微升/孔；

3.將微孔板放在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置5～10分鐘，中間和最后各混勻1～2次，然后將微孔板板底扣入磁力板上，磁吸10～30秒后將磁力板和微孔板一起拿起，甩凈孔內液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；