[發(fā)明專利]磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒及其提取核酸方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110275662.6
• 申請(qǐng)日: 2011-09-16
• 公開（公告）號(hào): CN102417902A
• 公開（公告）日: 2012-04-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盤寶進(jìn);溫和心;謝永平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄧曉安

1.一種磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，包括盒體和試劑，其特征在于：盒體包括磁力板（1）和可拆卸微孔板（2），可拆卸微孔板（2）由孔架（3）和微孔（4）兩部分組成；微孔（4）分單孔或多聯(lián)孔安置在孔架（3）上，試劑包括磁珠、裂解-結(jié)合液、洗滌液A、洗滌液B和洗脫液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于：所述微孔（4）的制作材料為聚苯乙烯、聚乙烯或聚丙烯。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于：所述微孔（4）的孔底為“U”形或“V”形，微孔（4）的容積為400微升以上。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于：所述磁力板（1）為長(zhǎng)方形釹鐵錋強(qiáng)磁片，形狀、尺寸與可拆卸微孔板（2）底部適配。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒，其特征在于：所述磁珠為SiO_2?包裹的氧化鐵納米顆粒，所述裂解-結(jié)合液為異硫氰酸胍消化液，所述洗滌液A為75%無(wú)水乙醇水溶液，所述洗滌液B為無(wú)水乙醇，所述洗脫液為電導(dǎo)率≧18微西門子的純水。

6.一種使用磁珠-微孔板法提取核酸試劑盒提取核酸方法，其特征在于：包括以下步驟：

①將樣品與裂解-結(jié)合液放入離心管內(nèi)充分作用后，在4000～10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下，離心5～15分鐘；

取上清液50～200微升/孔放入微孔板（1）的微孔（4）中，記錄樣品對(duì)應(yīng)的孔號(hào)，并用8通道微量移液器向微孔（4）加入磁珠5～10微升/孔；

③將微孔板（2）放在微量漩渦振蕩器中充分混勻，靜置5～10分鐘，中間和最后各混勻1～2次，然后將微孔板（2）板底扣入磁力板（1）上，磁吸10～30秒后將磁力板（1）和微孔板（2）一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；

④先分離微孔板（2）和磁力板（1），然后用8通道微量移液器向微孔（4）加入洗滌液A，50～200微升/孔，將微孔板（2）放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板（2）板底扣入磁力板（1）上，磁吸10～30秒后將磁力板（1）和微孔板（2）一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；重復(fù)操作此步驟3～5遍；

⑤再次分離微孔板（2）和磁力板（1），然后用8通道微量移液器向微孔（4）加入洗滌液B，50～200微升/孔，將微孔板（2）放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮，再將微孔板（2）板底扣入磁力板（1）上，磁吸10～30秒后將磁力板（1）和微孔板（2）一起拿起，甩凈孔內(nèi)液體，然后管口向下在吸水紙上輕叩以吸干殘留液體；

⑥將微孔板（2）移入干燥箱中45～65℃干燥10～20分鐘后，用8通道微量移液器向微孔（4）加入洗脫液，30～200微升/孔，將微孔板（2）放在微量漩渦振蕩器中振蕩使磁珠充分懸浮；

⑦將微孔板（2）移入恒溫箱中60～65℃作用10～20分鐘，期間振蕩混勻2～3次，最后將微孔板（2）板底扣入磁力板（1）上，磁吸10～30秒，上清液即為提取純化的核酸。