[發(fā)明專利]抗ERCC1 單克隆抗體4F9 及其用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110274473.7
• 申請(qǐng)日: 2011-09-16
• 公開（公告）號(hào): CN102786598A
• 公開（公告）日: 2012-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何為無;馬東輝;袁克湖;隋璐;王超;汪芳迅;袁麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 無錫傲銳東源生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;C12N5/20;G01N33/577
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明主要涉及可特異性識(shí)別和結(jié)合由切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(excision?repair?cross-complement-action?group?1，ERCC1)編碼的蛋白的單克隆抗體4F9，產(chǎn)生所述單克隆抗體的雜交瘤，包含所述單克隆抗體的組合物，以及所述單克隆抗體的使用方法和用途。

背景技術(shù)

惡性腫瘤是嚴(yán)重威脅人類健康的疾病之一，鉑類藥物參與的化療是其重要的治療手段。以順鉑為代表的鉑類藥物是20世紀(jì)60年代開發(fā)的高效廣譜的無機(jī)抗腫瘤藥，其屬于破壞DNA結(jié)構(gòu)和功能的細(xì)胞毒藥物。經(jīng)過長(zhǎng)期研究和發(fā)展，已相繼成功開發(fā)了順鉑(Cisplatin)、卡鉑(Carboplatin)、奈達(dá)鉑(Nedaplatin)、奧沙利鉑(Oxaliplatin)、舒鉑(Sunpla)和洛鉑(Lobaplatin)等鉑類藥物，這些鉑類藥物常與其他抗腫瘤藥物聯(lián)合使用，用于卵巢癌、肺癌、胃癌、宮頸癌、頭頸部癌、惡性淋巴瘤等多種癌癥的臨床治療。然而，腫瘤對(duì)鉑類藥物的耐藥性嚴(yán)重影響了這些藥物的治療療效。產(chǎn)生耐藥性的原因很多，其中DNA損傷修復(fù)能力的增強(qiáng)是導(dǎo)致對(duì)鉑類藥物的耐藥性的主要原因。

人體DNA受各種因素?fù)p傷后.其修復(fù)主要是通過核苷酸切除修復(fù)(Nueleotide?excision?repair，NER)途徑來完成。在該途徑中起重要作用的核苷酸ERCC基因家族能對(duì)核苷酸進(jìn)行切除和修復(fù)，以減少DNA的損傷。其中，切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因1(excision?repair?cross-complement-action?group?1，ERCC1)所編碼的蛋白參與DNA鏈的損傷識(shí)別和切割，在NER途徑中起著至關(guān)重要的作用，是ERCC基因家族和NER途徑的關(guān)鍵基因。ERCC1蛋白是核苷酸剪切修復(fù)復(fù)合體的5′核酸內(nèi)切酶，見于所有的腫瘤細(xì)胞中，其表達(dá)水平差異很大。

順鉑主要是通過與作用靶點(diǎn)DNA形成鉑-DNA聚合物對(duì)腫瘤細(xì)胞發(fā)揮作用。它在腫瘤細(xì)胞中水解為雙氯雙氨鉑，然后與DNA形成聚合物，從而影響細(xì)胞的復(fù)制與轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致DNA損傷。研究顯示，ERCC1過表達(dá)可使損傷的DNA迅速修復(fù)，導(dǎo)致對(duì)順鉑的耐藥性。因此，NER過程增強(qiáng)是導(dǎo)致對(duì)順鉑的耐藥性的一個(gè)重要機(jī)制。

2010年NCCN指南指出，ERCC1可以作為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的預(yù)后判斷和療效預(yù)測(cè)的標(biāo)記物。一方面，與低水平的ERCC1相比，高水平的ERCC1預(yù)示NSCLC患者的生存效果更佳(與治療無關(guān))，同時(shí)高水平的ERCC1還預(yù)示鉑類藥物的化療效果不佳。研究顯示，在完全切除的、未接受過圍手術(shù)期化療或放療的NSCLC患者中，ERCC1mRNA的水平是生存預(yù)后指標(biāo)。研究還顯示，高表達(dá)ERCC1的患者生存期顯著長(zhǎng)于低表達(dá)者。另一方面，已有多項(xiàng)轉(zhuǎn)化型研究證明，ERCC1水平可用于預(yù)測(cè)鉑類藥物治療NSCLC的療效，高水平者耐藥，低水平者敏感。Olaussen等發(fā)現(xiàn)，在國際癌輔助化療研究(IALT)中，僅低表達(dá)ERCC1蛋白的腫瘤患者可從含順鉑的輔助化療中獲益。Bepler等報(bào)道，在前瞻性采集自一項(xiàng)基于社區(qū)的III期隨機(jī)臨床研究的腫瘤標(biāo)本中，其原位ERCC1蛋白表達(dá)水平與卡鉑/吉西他濱治療或吉西他濱單藥治療后的疾病緩解成顯著負(fù)相關(guān)，即低表達(dá)ERCC1的患者緩解率更高。

因此，目前臨床上在進(jìn)行腫瘤輔助化療之前，通常通過免疫組織化學(xué)(IHC)病理實(shí)驗(yàn)確定腫瘤細(xì)胞中ERCC1的表達(dá)水平，以指導(dǎo)鉑類化療藥物的使用。IHC實(shí)驗(yàn)的核心為特異性結(jié)合ERCC1的單克隆抗體，其性能的優(yōu)劣直接決定著整個(gè)檢測(cè)的靈敏度和特異性，決定著指導(dǎo)臨床用藥的有效性。當(dāng)前，國內(nèi)外廣泛用于臨床病理一線的ERCC1單克隆抗體為8F1，但已有研究顯示，8F1在與ERCC1特異性結(jié)合的同時(shí)，還與非特異蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，這直接影響了免疫組化結(jié)果的特異性和可靠性。

因此，本領(lǐng)域迫切需要這樣的單克隆抗體，其不僅可與ERCC1特異性結(jié)合，而且與細(xì)胞內(nèi)的其他非特異蛋白不發(fā)生交叉反應(yīng)，以顯著提高IHC實(shí)驗(yàn)(例如，用于非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌等腫瘤的病理診斷的IHC實(shí)驗(yàn))的特異性和可靠性，從而更有效和更精確地對(duì)使用鉑類化療藥物的輔助化療進(jìn)行療效預(yù)測(cè)及預(yù)后判斷。

發(fā)明內(nèi)容

在本發(fā)明中，除非另有說明，否則本文中使用的科學(xué)和技術(shù)名詞具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的蛋白質(zhì)和核酸化學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞和組織培養(yǎng)、微生物學(xué)、免疫學(xué)相關(guān)術(shù)語和實(shí)驗(yàn)室操作步驟均為相應(yīng)領(lǐng)域內(nèi)廣泛使用的術(shù)語和常規(guī)步驟。同時(shí)，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關(guān)術(shù)語的定義和解釋。