[發明專利]一種用于診斷遲發性耳聾的GJB2基因p.V37I突變診斷試劑盒

無效

• 申請號: 201110273426.0
• 申請日: 2011-09-15
• 公開（公告）號: CN102304584A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 吳皓;楊濤
• 申請（專利權）人: 上海交通大學醫學院附屬新華醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 金重慶

技術領域

本發明涉及一種試劑盒，具體地說，是一種用于診斷遲發性耳聾的GJB2基因p.V37I突變診斷試劑盒。

背景技術

聽力是語言發育過程中不可缺少的因素之一。對患有兒童永久性聽力損失（Permanent?Childhood?Hearing?Impairment，PCHI）的患兒進行早期的預防和干預可取得良好的言語和認知發育。目前，普遍性新生兒聽力篩查（Universal?Newborn?Hearing?Screening，UNHS）可早期發現新生兒期的聽力損失，但對于發生于新生兒期以后的遲發性耳聾（發病率在9歲兒童中約為0.25‰-0.99‰），由于缺乏有效的風險因素評估和早期識別標識，尚缺乏有效的早期發現手段。

新生兒聽力篩查技術在世界各國廣泛開展，可通過此篩查早期發現新生兒期聽力損失并進行早期干預，以避免新生聾兒由聽力障礙而帶來的言語、語言等發育障礙。但發生于新生兒期以后的遲發性耳聾不能被新生兒聽力篩查所發現，目前尚缺乏能夠早期預警或早期發現的有效手段。遲發型耳聾的最初發現目前主要依靠家長對患兒聽力狀況的觀測或患者自我檢測，發現時間較晚，容易因為聽力損失影響言語、語言等學習交流能力的正常發展。?

耳聾基因檢測技術近十年來已在國內外得到廣泛應用，可對遺傳性耳聾進行有效檢測和診斷。遲發性耳聾基因檢測原理上可對存在遲發性耳聾遺傳風險的患兒進行早期預警，結合聽力篩查以達到早期檢測、干預和康復的目的。但此方法的瓶頸在于目前尚不知曉明確的可導致常見遲發性耳聾遺傳易感性的早期分子標識（基因突變），因此無法有針對性的開展遲發性耳聾基因檢測。

GJB2基因為中國人群常見聾病基因，其基因突變可導致隱性遺傳性耳聾。在GJB2基因眾多突變中，p.V37I突變較為常見，帶有p.V37I排它性突變（包括p.V37I純合，以及p.V37I與另外一個功能喪失突變的復合雜合兩種基因型）的個體易出現輕中度耳聾。

中國專利文獻CN101363054A公開了一種體外檢測遺傳性耳聾相關縫隙連接蛋白26基因GJB2突變的方法及檢測用試劑盒，通過進行聚合酶鏈反應，對GJB2基因基礎啟動區、外顯子1、外顯子2及剪切區域進行完整擴增，然后進行DNA序列測定，檢測GJB2基因突變的存在，能提高GJB2基因突變的檢出率和GJB2基因相關性遺傳性耳聾的診斷率。中國專利文獻CN1873027A公開了一種用于體外診斷非綜合征性常染色體隱性遺傳耳聾基因GJB2突變的引物及其應用，提供用于體外診斷非綜合征性常染色體隱性遺傳耳聾基因GJB2基因全編碼區突變及233-235delC熱點突變的引物，可一次性完成GJB2全編碼區和兩側重要剪切序列的擴增，該發明還提供含有該引物和ApaI內切酶的試劑盒或類似產品，適用于對非綜合征性常染色體隱性遺傳耳聾基因GJB2基因突變進行大規模的篩查及診斷、遺傳咨詢。李景之等運用PCR直接測序的方法對139例無親緣關系的NSHL患者進行突變篩查，將兩種突變p.F115C和p.V37I構建到pEGFP表達載體，并轉染Hela細胞，研究其細胞表達和定位情況（詳見：非綜合征性耳聾（NSHL）患者Cx26基因突變分析及兩種突變體的亞細胞定位.?遺傳,?2009,?31(7):?705-712.）。但是國際、國內尚無關于p.V37I排它性突變與遲發性耳聾相互關聯的報道。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種GJB2基因p.V37I突變的應用。

本發明的再一的目的是，提供一種用于診斷遲發性耳聾的GJB2基因p.V37I突變診斷試劑盒。

本發明的另一的目的是，提供一種用于診斷遲發性耳聾的GJB2基因p.V37I突變診斷試劑盒的應用。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案是：一種GJB2基因p.V37I突變在制備診斷遲發性耳聾產品中的應用，所述的p.V37I突變是p.V37I排他性突變。

所述的p.V37I排他性突變是p.V37I純合基因型突變。

所述的p.V37I排他性突變是p.V37I與一個功能喪失突變的復合雜合基因型突變。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：一種用于診斷遲發性耳聾的GJB2基因p.V37I突變診斷試劑盒，所述的試劑盒含有兩對巢式PCR擴增引物，所述的擴增引物為：

第一輪PCR的引物：GJB2?FO（SEQ?ID?NO.3）和GJB2?RO（SEQ?ID?NO.4）；第二輪PCR的引物：GJB2?FI（SEQ?ID?NO.5）和GJB2?RI（SEQ?ID?NO.6）。