[發(fā)明專利]家蠶中腸特異表達啟動子P3及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110273394.4
• 申請日: 2011-09-15
• 公開（公告）號: CN102296071A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏慶友;蔣亮;程廷才;陸改;金盛凱;王根洪;徐漢福
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/63;C12N15/66;C12N15/85
• 代理公司: 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.家蠶中腸特異表達啟動子P3，其特征在于：所述家蠶中腸特異表達啟動子P3含有如SEQ?ID?No:2所示核苷酸序列，所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的堿基長度不超過2073，源于家蠶BGIBMGA008060基因。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的家蠶中腸特異表達啟動子P3，其特征在于：所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的核苷酸序列如SEQ?ID?No:1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的家蠶中腸特異表達啟動子P3，其特征在于：所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的核苷酸序列如SEQ?ID?No:2所示的核苷酸序列。

4.權(quán)利要求1所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的制備方法，其特征在于，具體步驟如下：以家蠶基因組DNA為模板，進行PCR擴增，得家蠶中腸特異表達啟動子P3，所述左、右引物分別如SEQ?ID?No：3和SEQ?ID?No：4所示，PCR擴增條件為：94℃預(yù)變性4分鐘，94℃變性40秒、49℃退火40秒、72℃延伸2分鐘，共30個循環(huán)，最后72℃延伸10分鐘。

5.含有權(quán)利要求1所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的重組載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述家蠶中腸特異表達啟動子P3的重組載體，其特征在于：所述重組載體為P3-EGFP-SV40片段同基礎(chǔ)載體pBac[3×P3-DsRed?af]片段連接而得重組載體pBac[P3-EGFP-SV40-3×P3-DsRed?af]。

7.權(quán)利要求5所述重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于，所述P3-EGFP-SV40片段的構(gòu)建，具體步驟如下：酶切所述如SEQ?ID?No:1或如SEQ?ID?No:2所示的核苷酸序列，與用相同內(nèi)切酶酶切好的EGFP-SV40-1180載體連接，所述EGFP-SV40-1180載體由pSLfa1180fa與pBac[3×P3-EGFP?afm]中EGFP綠色熒光蛋白構(gòu)建，得中間載體P3-EGFP-SV40-1180，所得中間載體P3-EGFP-SV40-1180用限制性內(nèi)切酶AscⅠ酶切，得P3-EGFP-SV40片段。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述重組載體的構(gòu)建方法，其特征在于：所述EGFP-SV40-1180載體的構(gòu)建，包括以下步驟：所述EGFP綠色熒光蛋白引物，上游引物如SEQ?ID?No：6所示序列，下游引物如SEQ?ID?No：7所示序列，以所述pBac[3×P3-EGFP?afm]質(zhì)粒為模板，進行PCR擴增；擴增產(chǎn)物用BamHⅠ和NotⅠ進行酶切，得所述EGFP酶切片段，同時用BamHⅠ和NotⅠ酶切所述已包含SV40片段的pSLfa1180fa載體，得所述pSLfa1180fa載體酶切片段，連接酶切所得所述EGFP酶切片段和所述pSLfa1180fa載體酶切片段，得EGFP-SV40-1180載體。

9.含有權(quán)利要求1所述家蠶中腸特異表達啟動子P3在家蠶中腸特異表達活性蛋白的應(yīng)用。